石莼屬和滸苔屬綠藻的分析

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1、第vt卷第w期海洋與湖沼?2ˉqvto2qwusss年z月≤∞∞×≥≤∏ˉ?ousss石莼屬(Υλ?α)和滸苔屬(Εντερομορπηα)3綠藻的ΡΑΠ?分析?楊君安利佳王茜王宏偉蘇喬康曉慧k大連理工大學(xué)生物工程系大連ttystul?k大連醫(yī)科大學(xué)丹東分校丹東tt{ssul提要于t

2、

3、z年下半年在大連石廟海區(qū)采集石莼!孔石莼!礪菜!緣管滸苔!腸滸苔!管滸苔!剛毛藻等z種海藻樣品o采用°技術(shù)對大連地區(qū)綠藻門石莼屬和滸苔屬進行了初步的分子系統(tǒng)學(xué)研究?所試ys個引物中有vu個經(jīng)擴增得到了uvz個多態(tài)片段?應(yīng)用°≠°軟件包o按照°法和p法聚類分析的結(jié)果均表明o緣管

4、滸苔kΕντερομορπηαλινζαl與石莼屬有較近的親緣關(guān)系o應(yīng)深入探究其分類地位?關(guān)鍵詞石莼屬滸苔屬°學(xué)科分類號±z{

5、分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和完善o為分類學(xué)和系統(tǒng)學(xué)研究提供了許多新方法?

6、s年代初o建立在°≤k聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)l技術(shù)基礎(chǔ)上的°k隨機擴增多態(tài)性l技術(shù)一經(jīng)興起o就因其簡便!靈敏!快捷等特點而被迅速應(yīng)用于基因組的多態(tài)性分析o尤其是系統(tǒng)學(xué)和種間親緣關(guān)系的研究中o成為一種有效的分子標(biāo)記?近年來o°技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于高等植物和海藻分子系統(tǒng)學(xué)研究中k李寬鈺等ot

7、

8、z~石福臣等ot

9、

10、{~°¤·2o¤μ?εταλot

11、

12、v~2εταλot

13、

14、x

15、¤o￥~¤μ?±aεταλot

16、

17、y~°¤μ?εταλot

18、

19、{lo本文利用°技術(shù)對綠藻門石莼屬和滸苔屬基因組進行了初步的分析o以期確立一種能夠有效補充傳統(tǒng)分類方法的新手段?1材料與方法1q1樣品的采集與處理實驗所用的石莼目kˉ√¤ˉ¨?l!石莼科kˉ√¤|¨¤¨l!石莼屬kΥλ?αl中的石莼kΥλ?αλαχτυ2χαl!孔石莼kΥ.περτυσαl!礪菜kΥ.χονγλοβαταlo滸苔屬kΕντερομορπηαl中的緣管滸苔kΕν2τερομορπηαˉ?±?¤l!腸滸苔kΕ.ιντεστιναλισl!管滸苔kΕ.τυβυλοσαl以及作為對照的剛毛

20、藻kΧλαδοπηορα?3ql共計z種材料k每種ts株lo均于t

21、

22、z年下半年采自大連石廟海區(qū)?用蒸餾水仔細清洗新鮮藻體o洗去泥砂和其它附著物o然后用濾紙吸干表面水分o用于制備?1.2總?ΝΑ的提取和純化3遼寧省優(yōu)秀青年科研人才培養(yǎng)基金資助項目o

23、yvssx號?楊君o女o出生于t

24、zu年{月o碩士o現(xiàn)工作單位}大連醫(yī)科大學(xué)o郵編}ttysuzo∞p°¤?ˉ}o?¤±a∏±uyvq±¨·收稿日期}t

25、

26、

27、pstpuso收修改稿日期}t

28、

29、

30、psypstw期楊君等}石莼屬kΥλ?αl和滸苔屬kΕντερομορπηαl綠藻的°分析ws

31、參照2?ˉ¨等kt

32、

33、s

34、l的方法并加以改進?樣品經(jīng)液氮研磨成粉末后o加入提取緩沖液≈vh≤×otss°°2ˉr×μ??p≤k3{qslotss°°2ˉr∞×k3{qslotqw°2ˉr¤2≤ˉosquhk?/?l巰基乙醇o(jì)th°?°?于ysε溫育vs°?±o再加入trv體積x°2ˉr|o充分混勻o然后加入等體積氯仿Β異戊醇kuwΒtlo輕緩搖勻后o{sssμr°?±離心ts°?±?將上清液移至新管o并加入urv體積異丙醇o(jì)將沉降下來o用zsh乙醇洗滌t)u次后o在無菌風(fēng)下吹干o溶于wssΛˉt?×∞中kts°°2ˉr×μ??p≤ˉot°°2ˉr∞×l?當(dāng)沉淀完全溶解后o加入¤?¨于

35、vzε溫育vs°?±o然后重復(fù)氯仿Β異戊醇kuwΒtl的抽提步驟o在上清液中加入二倍體積無水乙醇o(jì)將純化后的沉降下來?沉淀吹干后溶于sqt?×∞中備用?1.3引物為3¨μ2±公司?組!組及部分組和組引物o共計ys個?1.4ΡΑΠ?反應(yīng)條件反應(yīng)總體積為usΛˉo其中包括ts倍緩沖液≈×μ??p≤ts°°2ˉrk3{qvlo≤ˉxs°°2ˉroa≤ˉuu°°2ˉr?ow種§×°k每種各tssΛ°2ˉrlosquΛ°2ˉr引物ous±a基因組ot單位פ′聚合酶?1.5ΡΑΠ?反應(yīng)程序反應(yīng)混合物在加入פ′聚合酶前o于

36、yε預(yù)變性ts°?±?待冷卻后加入פ′聚合

37、酶o在°≤

38、sp擴增儀上擴增wx個循環(huán)k

39、wε變性ys?ovyε復(fù)性{s?ozuε延伸tws?lo完成最后一個循環(huán)后于zuε繼續(xù)延伸ts°?±?為避免因°技術(shù)的重復(fù)性較差而影響實驗結(jié)果o作者做了多次重復(fù)實驗o只將重復(fù)性較好的引物用于最終的結(jié)果分析?并且在所有獲得的片段中o只分析了穩(wěn)定性較好的!大小為wxs)usss￥3的片段o未分析過大和過小的片段?1.6電泳檢測擴增產(chǎn)物經(jīng)含sqxΛar°ˉ溴化乙錠k∞l的tqwh瓊脂糖凝膠電泳o在w?r|°電場強度下電泳v?左右o然后在紫外燈觀察結(jié)果并照相?1.7數(shù)據(jù)處理根據(jù)隨機擴增片段在電場中的遷移率與堿基對數(shù)目以ts為

40、底的對數(shù)成反比o按照標(biāo)準(zhǔn)片段kp?±§≈?r∞|2的