快速測定植物葉片葉綠素含量方法的探討

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1、第19卷,第4期光　譜　實　驗　室Vol.19,No.42002年7月ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryJuly,2002快速測定植物葉片葉綠素含量方法的探討①楊敏文(臺州職業(yè)技術(shù)學院醫(yī)學院　浙江省臺州市高等教育園區(qū)　318000)摘　　要　　本文應用分光光度法研究了3種提取溶劑對測定植物葉片葉綠素含量的影響,結(jié)果表明,用不同提取溶劑提取葉綠素,提取液吸收光譜相似。其中丙酮2乙醇提取法速度快,葉綠素得率高、穩(wěn)定性好,精密度高,并提出了一種快速測定葉綠素含量的方法。關(guān)鍵詞　葉綠素含量,測定,方法,葉片。中圖分類號:O657.32　　　文獻標識

2、碼:A　　　文章編號:100428138(2002)04204782041　前言植物葉片葉綠素含量與光合速率、營養(yǎng)狀況等密切相關(guān),實踐上通常測定葉綠素含量以表征植物生長狀況,也往往把葉色變化作為看苗診斷和肥水管理的重要指標。葉綠素含量測定方法主要有[1][2]分光光度法和活體葉綠素儀法兩大類,最近又發(fā)展了光聲光譜法。其中,應用最為廣泛的是分[3][4]光光度法。用得較多的是由Mackinney提出經(jīng)Arnon解釋和推導的Arnon法以及80年代初提[5]出的乙醇提取法,本試驗提出另一種提取溶劑——丙酮2乙醇混合法提取葉綠素,以常規(guī)的Arnon法(提取溶劑為80%丙酮)和乙醇提取法作

3、對比,就3種提取液對測定植物葉片葉綠素含量的影響進行了研究比較,并提出了一種快速測定葉綠素含量的方法。2　實驗部分2.1　儀器與試劑UV2401PC型紫外可見分光光度計(日本島津,狹縫寬度012nm,吸光池厚1cm),FSH2ê高速電動勻漿器(金壇望華科教儀器廠),FA1004A型電子天平(上海精天電子儀器廠)。將珊瑚樹嫩葉用雙蒸水洗凈,吸水紙吸干表面水分,作為試驗材料。葉綠素提取溶劑為:95%丙酮2乙醇(用體積比為2∶1的丙酮2無水乙醇混合液配成95%的水溶液,下同)、95%乙醇和80%丙酮,均為分析純。2.2　實驗方法葉綠素的提取:將材料去脈剪碎(約1—2mm見方),隨機取樣,

4、準確稱重取015g(精確到011mg),放入50mL比色管中,分別加入上述三種提取液25mL;另稱015g樣品,加6mL雙蒸水和少量CaCO3,勻漿,定容至25mL,過濾,取2125mL濾液放入50mL比色管中,加23175mL丙酮2乙①聯(lián)系人,電話:(0576)5157136作者簡介:楊敏文(1965—),女,浙江省臺州市人,高級講師,華東師范大學2001年在職教育碩士,從事化學教學與研究。收稿日期:2002201201第4期楊敏文:快速測定植物葉片葉綠素含量方法的探討479醇(2∶1),使之成為95%丙酮2乙醇勻槳提取液。比色管加塞放置于25℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)暗中提取葉綠素。每種提

5、取方法重復3次。葉綠素提取液吸收光譜的測定:用分光光度計在600—700nm范圍內(nèi)對不同葉綠素提取液進行掃描,波長精度為012nm。葉綠素含量測定:分別以提取溶劑作空白,測定葉綠素提取液吸光度A645、A663,利用Arnon公式:葉綠素a濃度(mg?L):Ca=12.7A663-2.69A645;葉綠素b濃度(mg?L):Cb=22.9A645-4.68A663;葉綠素總濃度(mg?L):Ca+b=Ca+Cb。計算提取液中葉綠素濃度,換算為每克鮮葉葉綠素含量(mg?g鮮重)。3　結(jié)果與討論3.1　葉綠素提取液的吸收光譜4種葉綠素提取液的吸收光譜在600—700nm范圍內(nèi)基本相似(

6、圖1),說明4種葉綠素提取液的光吸收性質(zhì)基本相似,可以用Arnon公式進行葉綠素含量的計算。3.2　不同提取溶劑對葉綠素提取總量的影響不同提取溶劑對葉綠素提取總量有著明顯的影響(表1),95%丙酮2乙醇提取的葉綠素總量最高,高于傳統(tǒng)的80%丙酮提取法2915%,95%乙醇提取的葉綠素總量亦比80%丙酮法圖1　珊瑚樹葉片葉綠素在不同提取液中的吸收光譜高915%。95%丙酮2乙醇提取葉片勻漿的葉綠1——95%丙酮2乙醇;2——95%乙醇;素總量與提取葉片碎片的葉綠素總量沒有顯著3——80%丙酮;4——95%丙酮2乙醇(勻漿)。差異。3.3　不同提取溶劑提取葉綠素的進程不同提取溶劑提取葉

7、綠素速度差異較大,提取完全程度也不同(表1)。提取速度最快的是95%丙酮2乙醇,葉綠素經(jīng)過8h已經(jīng)基本提取完全,葉片碎片變白;其次是95%乙醇,而80%丙酮提取速度最慢,后兩者在24h內(nèi)沒有完全提取出葉綠素。從提取速度來看,95%丙酮2乙醇要優(yōu)于95%乙醇和80%丙酮。葉片勻漿后用95%丙酮2乙醇在015h就已經(jīng)提取完全,大大加快了葉綠素提取速度。①表1　不同提取溶劑提取葉綠素的進程和葉綠素總量葉綠素含量(mg?g鮮重)提取溶劑0.5h1h2h4h8h16h24h葉綠