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1、肝炎病毒抗原抗體檢測的 原理及檢測試劑的選擇原則解放軍第四七四醫(yī)院張和平6/17/20211ELISA原理HBsAg:雙抗體夾心法HBeAg:雙抗體夾心法抗HBs:雙抗原夾心法抗Hbe:競爭法 抗HBc:競爭法6/17/202121.在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成“夾心復合物”。2.類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現(xiàn)象，如按常法測定，所得結果將低于實際的含量，這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應（hookeffect）3.因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤
2、狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結果?！耠p抗體夾心法6/17/20213兩對半與美國Abbott試劑的比較河北醫(yī)學雜志（新）>>2005年第10期總第10期(月刊)>>論著乙型肝炎病毒（HBV）標志物是國內實驗室經常檢測的項目。兩對半試劑生產廠家較多，試劑質量良莠不齊。五家試劑公司分別為英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司、上海榮盛生物技術有限公司、北京萬泰生物藥業(yè)有限公司、珠海麗珠試劑有限公司、深圳月亮灣生物工程有限公司。各廠家質量有較大差異,為了提高乙肝兩對半的檢驗質量，避免誤診、漏診，以美國Abb
3、ott試劑作為參比試劑，對五家公司的兩對半試劑的質量進行了對比、評價［4］。6/17/20214兩對半與美國Abbott試劑的比較1.本次試驗AbbottAxsym系統(tǒng)檢測標本中HBsAg結果最高至210S/CO，HBsAb結果最高至6000mIU/mL，HBeAg最高至11600PEIU/mL，以Abbott試劑測定標本的S/CO值為橫坐標，五家試劑測定相應標本的OD值為縱坐標，分別繪出了HBsAg、HBsAb及HBeAg的濃度關系圖，故在實際應用中的許多一步法試劑仍有HOOK效應存在。對于HBsAg,
4、A、C、D三家試劑存在HOOK效應；對于HBsAb,A試劑存在HOOK效應；對于HBeAg，D試劑存在HOOK效應。此結果可供臨床檢驗部門參考。6/17/20215兩對半與美國Abbott試劑的比較1.五家試劑對于HBsAg,HBsAb,HBeAg項目的可檢出檢測下線分別為5.0S/CO、17mIU/mL、8.5PEIU/mL,2而Abbott試劑的陽性檢測下線分別是1.0S/CO、10mIU/mL、0.28PEIU/Ml,說明五家試劑在靈敏度上均低于Abbott試劑,3.國外全自動分析儀系統(tǒng)檢測靈敏度，
5、速度，準確性均高于國內試劑。4.各家ELISA試劑的各個檢測項目特異性均較好，靈敏度相對較差，尤其是HBeAg，需要提高靈敏度［11］。結果表明除對于HBcAb試劑D的相對靈敏度較差外；其它的各家試劑的各個檢測項目的相對靈敏度、相對特異性及總符合率均較好，基本上能滿足臨床及實驗室的要求，此結果可供參考。6/17/20216●雙抗體夾心法4.因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。6.雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因
6、子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。6/17/20217雙抗體夾心法7.用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現(xiàn)出假陽性反應。8.雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標。9.假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，應分別包被固相和制備酶結合物。例如HBsAg的a決定簇，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，6/17/20218雙抗原夾心法測抗體1
7、.反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。2.此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對高于間接法。3.乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。4.本法關鍵在于酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。6/17/20219競爭法測抗體1.其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。2.標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺于陰性反應。3.抗HBc.抗Hbe:ELISA一般采用此法。6/17/202
8、110試劑盒選擇◎衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標簽的產品，試劑應從靈敏度，特異性，精密度，穩(wěn)定性，簡便性，安全性及經濟性作出全面的評價。◎靈敏度：1）為試劑檢出被檢物質的最低量的能力；2）為試劑對人群或大量樣品中陽性檢出的能力（假陰性越少越好），取決于包被物的全面性。3)每一批新試劑應作實驗對照6/17/202111血液檢測HBsAgELISA陽
