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1、肝炎病毒抗原抗體檢測的 原理及檢測試劑的選擇原則解放軍第四七四醫(yī)院張和平8/10/20211ELISA原理HBsAg:雙抗體夾心法HBeAg:雙抗體夾心法抗HBs:雙抗原夾心法抗Hbe:競爭法 抗HBc:競爭法8/10/202121.在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合，而不再形成“夾心復合物”。2.類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象，如按常法測定，所得結(jié)果將低于實際的含量，這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)（hookeffect）3.因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴重時
2、，反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果?！耠p抗體夾心法8/10/20213兩對半與美國Abbott試劑的比較河北醫(yī)學雜志（新）>>2005年第10期總第10期(月刊)>>論著乙型肝炎病毒（HBV）標志物是國內(nèi)實驗室經(jīng)常檢測的項目。兩對半試劑生產(chǎn)廠家較多，試劑質(zhì)量良莠不齊。五家試劑公司分別為英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司、上海榮盛生物技術(shù)有限公司、北京萬泰生物藥業(yè)有限公司、珠海麗珠試劑有限公司、深圳月亮灣生物工程有限公司。各廠家質(zhì)量有較大差異,為了提高乙肝兩對半的檢驗質(zhì)量，避免誤診、漏診，以美國Abbott試劑作為參比試劑，
3、對五家公司的兩對半試劑的質(zhì)量進行了對比、評價［4］。8/10/20214兩對半與美國Abbott試劑的比較1.本次試驗AbbottAxsym系統(tǒng)檢測標本中HBsAg結(jié)果最高至210S/CO，HBsAb結(jié)果最高至6000mIU/mL，HBeAg最高至11600PEIU/mL，以Abbott試劑測定標本的S/CO值為橫坐標，五家試劑測定相應(yīng)標本的OD值為縱坐標，分別繪出了HBsAg、HBsAb及HBeAg的濃度關(guān)系圖，故在實際應(yīng)用中的許多一步法試劑仍有HOOK效應(yīng)存在。對于HBsAg,A、C、D三家試劑存在HOOK效應(yīng)；
4、對于HBsAb,A試劑存在HOOK效應(yīng)；對于HBeAg，D試劑存在HOOK效應(yīng)。此結(jié)果可供臨床檢驗部門參考。8/10/20215兩對半與美國Abbott試劑的比較1.五家試劑對于HBsAg,HBsAb,HBeAg項目的可檢出檢測下線分別為5.0S/CO、17mIU/mL、8.5PEIU/mL,2而Abbott試劑的陽性檢測下線分別是1.0S/CO、10mIU/mL、0.28PEIU/Ml,說明五家試劑在靈敏度上均低于Abbott試劑,3.國外全自動分析儀系統(tǒng)檢測靈敏度，速度，準確性均高于國內(nèi)試劑。4.各家ELISA試
5、劑的各個檢測項目特異性均較好，靈敏度相對較差，尤其是HBeAg，需要提高靈敏度［11］。結(jié)果表明除對于HBcAb試劑D的相對靈敏度較差外；其它的各家試劑的各個檢測項目的相對靈敏度、相對特異性及總符合率均較好，基本上能滿足臨床及實驗室的要求，此結(jié)果可供參考。8/10/20216●雙抗體夾心法4.因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應(yīng)注意可測范圍的最高值。6.雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種
6、動物IgG的Fc段結(jié)合。8/10/20217雙抗體夾心法7.用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結(jié)合，表現(xiàn)出假陽性反應(yīng)。8.雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標。9.假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，應(yīng)分別包被固相和制備酶結(jié)合物。例如HBsAg的a決定簇，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，8/10/20218雙抗原夾心法測抗體1.反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測
7、相應(yīng)的抗體。2.此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對高于間接法。3.乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。4.本法關(guān)鍵在于酶標抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標記方法。8/10/20219競爭法測抗體1.其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結(jié)合。2.標本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。3.抗HBc.抗Hbe:ELISA一般采用此法。8/10/202110試劑盒選擇◎衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使
8、用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標簽的產(chǎn)品，試劑應(yīng)從靈敏度，特異性，精密度，穩(wěn)定性，簡便性，安全性及經(jīng)濟性作出全面的評價?！蜢`敏度：1）為試劑檢出被檢物質(zhì)的最低量的能力；2）為試劑對人群或大量樣品中陽性檢出的能力（假陰性越少越好），取決于包被物的全面性。3)每一批新試劑應(yīng)作實驗對照8/10/202111血液檢測HBsAgELISA陽
