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1、以上介紹的方法用于測定中性蛋白酶(pH7.2)。若要測定酸性蛋白酶或堿性蛋白酶,則把配制酪蛋白溶液和稀釋酶液用的pH緩沖液換成相應pH緩沖液即可。現(xiàn)把幾種常用pH緩沖液配方提供如下:1.5.1pH7.5磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L)稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)6.02g和磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)0.5g以蒸餾水溶解定容至1000mL。1.5.2pH2.5乳酸-乳酸鈉緩沖液(0.05mol)A液:稱取80%～90%乳酸10.6g,加蒸餾水稀釋定容至1000mL。B液:稱取70
2、%乳酸鈉16g,加水稀釋定容至1000mL。取A液16mL與B液1mL混合稀釋一倍即成。1.5.3pH3.0乳酸-乳酸鈉緩沖液(0.05mol)A液:稱取80%～90%乳酸10.6g,以水定容至1000mL。B液:稱取70%乳酸鈉16g,蒸餾水溶解定容至1000mL。取A液8mL與B液1mL,混合稀釋一倍即成。1.5.4pH10硼砂-氫氧化鈉緩沖液A液:稱取硼砂19.08g,用蒸餾水溶解定容至1000mL(0.05mol)。B液:稱取氫氧化鈉8g,用蒸餾水溶解定容至1000mL(0.2N)。取A液250mL
3、,B液215mL混合,用蒸餾水稀釋定容至1000mL即成。1.5.5pH11.0硼砂-氫氧化鈉緩沖液A液:稱取硼砂19.08g,用蒸餾水定容至1000mL。B液:稱取氫氧化鈉4g,用蒸餾水定容至1000mL。取A液與B液等量混合。1.5.62%酪蛋白溶液配成酸性時,須先加數(shù)滴濃乳酸,使之濕潤以加速其溶解。請問50mmol/L的乳酸鈉緩沖液（PH4.5）和125mmol/L的酒石酸鈉緩沖液(PH3.0)如何配制？？從瓶子上查1mol/L的試劑要加多少水，按比例加，然后分別稀釋20倍，8倍就行了。調PH比較麻煩
4、，配50mmol/L的乳酸鈉用乳酸調到PH4.5125mmol/L的酒石酸鈉緩沖液(PH3.0)用酒石酸/氫氧化鈉調到3.0調PH的原則是不引入其他離子。有這個公式的無機化學上有緩沖溶液buffersolution緩沖液是一種能在加入少量酸或堿時抵抗pH改變的溶液。PH緩沖系統(tǒng)對維持生物的正常pH值，正常生理環(huán)境起重要作用。多數(shù)細胞僅能在很窄的pH范圍內進行活動，而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現(xiàn)的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩沖體系，它們時蛋白質、重碳酸鹽緩沖體系。每種緩沖體系所占的分量在各
5、類細胞和器官中是不同的。在生化研究工作中，常常要用到緩沖溶液來維持實驗體系的酸堿度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到我們工作的成效。如果提取酶實驗體系的pH值變化或變化過大，會使酶活性下降甚至完全失活。所以我們要學會配制緩沖溶液。由弱酸及其鹽組合一起使具有緩沖作用。生化實驗室常常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羥甲基氨基甲烷）等系統(tǒng)，在生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因為有時影響實驗結果的因素并不是緩沖液的pH值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬
6、酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產生不需要的反應。硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復鹽、如蔗糖。檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用。磷酸鹽：在有些實驗，它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物，重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來。而且它在pH7.5以上時緩沖能力很小。三羥甲基氨基甲烷：它可以和重金屬一起作用，但在有些系統(tǒng)中也起抑止的作用。其主要缺點時溫度效應。這點往往被忽視，在室溫pH是7.8的Tris一緩沖液，在4℃時是8.4，在37℃時是7.4，因此，4℃配制的緩沖液
7、拿到37℃測量時，其氫離子濃度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，緩沖能力很差。緩沖液的pH值由哪些因素決定？設緩沖系統(tǒng)的弱酸的電離常數(shù)為K（平衡常數(shù)），平衡時弱酸的濃度為[酸]，弱酸鹽的濃度為[鹽]，則由弱酸的電離平衡式可得下式：根據(jù)此式可得出下列幾點結論：（1）緩沖液的pH值與該酸的電離平衡常數(shù)K及鹽和酸的濃度有關。弱酸一定，但酸和鹽的比例不同時，可以得到不同的pH值。當酸和鹽濃度相等時，溶液的pH值與PK值相同。（2）酸和鹽濃度等比例也增減時，溶液的pH值不便。（3）酸和鹽濃度相等時，緩沖液的緩沖
8、效率為最高，比例相差越大，緩沖效率越低，一般地說緩沖液有效緩沖范圍為PK±1pH。從上述可知，只要知道緩沖對的PK值，和要配制的緩沖液的pH值（及要求的緩沖液總濃度）時，可按公式計算出[鹽]和[酸]的量。這樣算涉及到對數(shù)的換算，較麻煩，前人為減少后人的計算麻煩，經計算已為我們總結出pH值與緩沖液對離子用量的關系列出了表格。講義附錄部分節(jié)錄有磷酸緩沖液的配制表。只要我們知道要配制的緩沖液的pH，經查表便可計算處所用
