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《甘草中總黃酮的提取與含量測(cè)定》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、甘草中總黃酮的提取及含量測(cè)定前言甘草是我國(guó)傳統(tǒng)常用中草藥之一,也是我國(guó)重要的植物資源?。甘草黃酮類(lèi)成分是甘草中最重要的活性成分之一,具有抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)一t5血管功能、增強(qiáng)免疫力等作用。因此,開(kāi)展甘草的深加工,使甘草資源得以充分利用,增加資源的附加值,前景十分可觀。為此,筆者以甘草為對(duì)象,研究了甘草黃酮的乙醇回流提取工藝,單因素試驗(yàn)確定各因素對(duì)提取工藝的影響,正交試驗(yàn)確定甘草黃酮提取的最佳工藝條件。1材料與方法1.1材料甘草,市售;試劑:亞硝酸鈉、碳酸鈉、石油醚、蒸餾水、氫氧化鈉、鹽酸、無(wú)水乙醇、蘆丁;儀器:燒杯、容量瓶
2、、移液管、玻璃棒、量筒、回流裝置、濾紙、HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋、分析天平、AB104.N電子天平、布氏漏斗、SHZ—C型循環(huán)水多用真空泵、分光光度計(jì)。1.2方法1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制稱取蘆丁對(duì)照品10mg,用95%的乙醇溶解,搖勻,定容至10ml,使之成為濃度為1mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液,作為貯備液備用。量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml,分別加水至3ml,加5%亞硝酸鈉溶液0.5ml,放置6min,加10%的硝酸鋁溶液0.5m1,搖勻、放置6min后加5%的氫氧化鈉溶液2.5m1,混勻、放置
3、15min后蒸餾水定容至10ml。用紫外分光光度計(jì)在500nm處測(cè)吸光度,以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.2.2材料處理取甘草根莖粉(粉碎過(guò)40-60目篩)3g置于燒杯中,按甘草粉末:乙醇(1:30)加入90ml濃度為70%的乙醇混合均勻.1.2.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)(按每組自己做的時(shí)候用的方法的具體過(guò)程寫(xiě))第五組:1.配置蘆丁標(biāo)液:2.配置標(biāo)準(zhǔn)曲線所需不同濃度溶液3.測(cè)吸光度,以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.處理樣品5.測(cè)出樣品吸光度,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線,得出樣品總黃酮含量1.2.4甘草黃酮含量測(cè)定
4、收集濾液并測(cè)量濾液體積,取樣按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測(cè)定其吸光度值,根據(jù)公式計(jì)算每克甘草中黃酮的含量。(有稀釋的寫(xiě)清稀釋了多少倍等)2結(jié)果與分析測(cè)出樣品吸光度為0.146.對(duì)比出標(biāo)準(zhǔn)曲線得出濃度為0.0213mg/ml此濃度為10ml樣品處理液的濃度。則3ml參比原液中物質(zhì)的量為0.0213mg/ml*0.01L=0.000213mg則參比原液的濃度為0.000213/0.003=0.071mg/ml則樣品原液的濃度為0.071*5=3.55mg/ml提取原液有20ml,則樣品中甘草黃酮含量為3.55*20/3=23.67mg/
5、g3結(jié)論經(jīng)過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定影響提取含量的主要因素為乙醇濃度、時(shí)間、溫度、料液比。因此先進(jìn)行單因素試驗(yàn),根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果,以乙醇濃度、時(shí)間、溫度、料液比為因素、進(jìn)行(3)正交試驗(yàn),根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果確定最佳工藝。根據(jù)其他幾組同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果做出如下分析乙醇濃度對(duì)提取含量的影響。由圖2可知,乙醇濃度的最優(yōu)水平為75%,而在兩側(cè)的濃度范圍內(nèi)提取含量都是隨之下降的。乙醇濃度越大,極性越小,增大極性小的黃酮類(lèi)溶出,從而在一定乙醇濃度范圍內(nèi),提取含量呈上升趨勢(shì);當(dāng)乙醇濃度超過(guò)一定范圍,即極性過(guò)大,減少了黃酮糖苷類(lèi)等的溶出,從而提取含量呈下降
6、趨勢(shì)。因而在設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)時(shí),將其濃度選在75%左右。溫度對(duì)提取含量的影響。由圖3可知,當(dāng)溫度低于85℃時(shí),隨著溫度的升高,從熱動(dòng)力學(xué)方面增加了黃酮類(lèi)的溶出,從而提取含量呈上升趨勢(shì);當(dāng)溫度高于85℃時(shí),可能黃酮類(lèi)發(fā)生水解、裂解或者黃酮類(lèi)之間發(fā)生了一系列反應(yīng),從而使提取含量呈下降趨勢(shì)。因而在設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)時(shí),溫度選擇在85℃左右。時(shí)間對(duì)提取含量的影響。由圖4可知,當(dāng)時(shí)間少于3h時(shí),由于時(shí)間的增大有助于黃酮類(lèi)的溶出,從而提取含量呈上升趨勢(shì);當(dāng)時(shí)間超過(guò)3h時(shí),提取含量反而略微降低。理論上講在3.5h提取含量應(yīng)趨于一個(gè)平衡值,或者比3h
7、稍有上升趨勢(shì),然后再趨于一個(gè)平衡值。這可能是由于加熱時(shí)間過(guò)長(zhǎng),造成黃酮糖苷類(lèi)的水解,導(dǎo)致黃酮檢出量減少,從而提取含量呈下降趨勢(shì)。因此,在正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí),時(shí)間應(yīng)選擇在3h左右。料液比對(duì)提取含量的影響。由圖5可知,當(dāng)料液比小于1:30時(shí),隨著料液比的增大提取含量呈上升趨勢(shì);當(dāng)料液比高于1:30時(shí),隨著料液比的增大反而呈下降趨勢(shì)。料液比影響溶劑的極性,從而影響了不同極性黃酮類(lèi)的溶解性;同時(shí)能耗也隨著料液比的增大而增大,導(dǎo)致在后續(xù)試驗(yàn)萃取過(guò)程中萃取劑用量也隨之增加。因此在設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)時(shí),將料液比選擇在1:30左右。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果
8、,設(shè)計(jì)k(3)正交試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可以看出提取甘草黃酮的最優(yōu)方案為A。BCD,即料液比為1:20,度為85℃,提取時(shí)間為4h,乙醇濃度為75%。由極差分析可知,各因素主次順序?yàn)镈BAC,即乙醇濃度對(duì)甘草黃酮的提取含量影響最大,溫度對(duì)甘草黃酮提取含量影響次之,影響最小的因素是提取