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1、甘草總黃酮含量測定方法研究論文【摘要】目的選擇適宜的對照品，建立能夠準確測定甘草中總黃酮含量的方法。方法針對甘草苷、柚皮苷、蘆丁3種對照品分別使用紫外分光光度法，通過全波長掃描，比較不同對照品和樣品與顯色前后的最大吸收波長，從而確定適合的對照品。結(jié)果甘草苷對照品和樣品液經(jīng)過堿處理后最大吸收波長分別為334，334.5nm且全波長掃描后得到峰形基本一致，而柚皮苷對照品經(jīng)過相同處理后最大吸收波長在419.5nm，蘆丁對照品和樣品分別經(jīng)過Al2（NO3）3-NaOH-NaNO2顯色后最大吸收波長在510nm和363nm。通過對3種方法的測定結(jié)果進行統(tǒng)計學分析.freelinationofflavo
2、noidsinGlycyrrhiza.MethodsToparethelargestabsorptionetry.ResultsStandardLiquiritinandsamplesprocessedbyalkalihadthelargestabsorptionatthe334nmand334.5nminecontentofflavonoidsinglycyrrhizaetrybystandardLiquiritinisapracticalmethodetry甘草中的黃酮類成分包括黃酮類、二氫黃酮類、黃酮醇類、異黃酮類、查爾酮類和雙黃酮類［1］化合物，其中以二氫黃酮類和查爾酮類含量較高［2
3、］。二氫黃酮類包括：甘草苷(liquiritin)、甘草苷元(liquiritigenin)、新甘草苷(neoliquiritin)、甘草素（liquiritigenin）等，查爾酮類包括：異甘草苷(isoliquiritin)、異甘草素（isoliquiritigenin）、異甘草苷元(isoliquiritigenin)、新異甘草苷(neoisoliquiritin)等［3～7］。而其中比例較大的成分以甘草苷為主［8］。甘草總黃酮的測定常用蘆?。?～10］、柚皮苷［11～13］為對照品通過紫外分光光度法進行測定，而《中國藥典》中甘草項下沒有規(guī)范總黃酮成分含量的測定方法［14］，導致甘草總
4、黃酮成分有多種不同的測定方法。本實驗研究通過對不同測定方法進行考察，比較不同對照品和樣品采用相應(yīng)方法顯色后的最大吸收波長，對3種對照品相應(yīng)測定結(jié)果分析，確定最適宜甘草總黃酮含量測定的對照品和測定方法。1器材1.1儀器HITACHIU-2000Spectrophotometer。1.2樣品甘草生藥樣品由北京中醫(yī)藥大學王文全教授提供和鑒定,全部為甘草GlycyrrhizauralensisFisch（樣品按來源依次編號為1.杭錦旗1年生；2.杭錦旗2年生；3.杭錦旗3年生；4.杭錦旗4年生；5.杭錦旗5年生；6.新疆烏蘇3年生；7.杭錦旗野生；8.杭錦旗野生橫生莖；9.甘肅金塔野生；10.寧夏鹽
5、池野生；11.甘肅酒泉野生；除杭錦旗野生橫生莖外其余10份樣品均為根）。1.3試劑供含量測定用甘草苷（編號：111610）、柚皮苷（編號：110722）：中國藥品生物制品檢定所；蘆丁對照品由北京中醫(yī)藥大學馬長華教授制備；氫氧化鉀(ＡＲ)、甲醇(ＡＲ)、硝酸鋁（AR）、亞硝酸鈉（AR）、氫氧化鈉（AR）。2方法2.1對照品溶液的制備精密稱定甘草苷、柚皮苷、蘆丁標準品適量,用甲醇溶解,分別定容于25，10，10ml容量瓶中,制得濃度為0.07504ｇ·Ｌ-1的甘草苷對照品溶液、0.968ｇ·Ｌ-1的柚皮苷對照品溶液和1.003ｇ·Ｌ-1的蘆丁對照品溶液。2.2樣品的提取取甘草粉末適量,精密稱定,
6、加甲醇50ml,稱重,（250in,稱重,補足損失重量,.freell,加入1ml甲醇,其中一份加入10%ＫＯＨ溶液0.5ml顯色,室溫放置5min,用甲醇稀釋至10ml，以相應(yīng)溶劑為空白，在λ334nm處測定吸收度。2.3.2柚皮苷為對照品的測定方法供試液制備同“2.3.1”項，在波長419nm處測定吸收度。2.3.3蘆丁為對照品的測定方法精確吸取提取液0.5ml，加3ml蒸餾水，5%亞硝酸鈉溶液0.5ml放置6min，加10%硝酸鋁溶液0.5ml，混勻后放置6min，加5%氫氧化鈉2.5ml混勻，放置15min后蒸餾水定容至10ml。以相應(yīng)溶劑為空白，在波長510nm處測定吸收度。2.4
7、方法學考察2.4.1以甘草苷為對照品方法學考察甘草苷方法標準曲線的測定：精確吸取甘草苷對照品溶液0.25,0.5,0.75,1,1.25,1.5ml置6個10ml容量瓶中,按“2.3.1”項下操作。以吸收度A為縱坐標,對照品的濃度C(mg/ml)為橫坐標,得線性回歸方程:y=66.753x-0.0178,ｒ=0.9999,線性范圍為18.76～112.56μｇ。顯色30min內(nèi)穩(wěn)定。甘草苷方法重復性實驗：取6
