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《9102-2015.05.29-響應面法優(yōu)化合浦珠母貝糖胺聚糖提取工藝的研究(1)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、基金項目：廣東省公益研究與能力建設專項(2014A020217009)；廣東省海洋漁業(yè)科技與產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項科技攻關與研發(fā)項目(A201501C08)；中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項資金項目(2014TS25)；農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品加工重點實驗室開放基金項目(NYBJG201408)資助。作者簡介：周小雙(1991-)，女，碩士研究生，水產(chǎn)品加工與質量安全。（通訊作者：楊賢慶，男，研究員，yxqgd@163.com）響應面法優(yōu)化合浦珠母貝糖胺聚糖提取工藝周小雙1,2，王錦旭1，楊賢慶1,*，林婉玲1，魏涯1（1.
2、中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品加工重點實驗室，國家水產(chǎn)品加工技術研發(fā)中心，廣州，510300；2.上海海洋大學食品學院，上海，201306）摘要：以合浦珠母貝全臟器為原材料，經(jīng)解凍勻漿和熱水浸提后，采用枯草桿菌中性蛋白酶和胰蛋白酶雙酶酶解，sevage法除蛋白兩次，清液醇沉得糖胺聚糖粗制品GAG，粗制品經(jīng)DEAE-52離子交換柱純化后得精制品。在單因素試驗基礎上，以粗制品得率與糖胺聚糖含量的乘積Y/(×10-4)為響應值，加酶量、液料比、酶解時間為影響因子，利用響應面試驗分析法優(yōu)化GAG的粗提
3、工藝，得最佳提取工藝：加酶量為1.14%（枯草桿菌中性蛋白酶與胰酶的比例為7:8）；液料比為3:1；酶解時間為4.1h。在此條件下，糖胺聚糖粗制品得率為0.518%，糖胺聚糖含量為10.9%，經(jīng)DEAE-52柱純化后的糖胺聚糖含量為89%。故采用響應面法優(yōu)化合浦珠母貝糖胺聚糖提取工藝是可行的，有助于后期的生物活性研究。關鍵詞：合浦珠母貝；糖胺聚糖；響應面法合浦珠母貝（Pinctadamartensii），又稱馬氏珠母貝，雙殼綱，珍珠貝科。1965年我國成功開展其人工育苗，自此海水珍珠養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展[1]，在我
4、國南方沿海海域均有分布。近幾年對于合浦珠母貝的研究主要是遺傳育種、珍珠層結構、插核育珠等[2]，而針對軟體部貝肉的研究不多。目前，合浦珠母貝貝肉年產(chǎn)量達2000t以上，大多用作食材或飼料，利用率不高，亟待高值化開發(fā)利用，具有良好的應用前景。糖胺聚糖（Glycosaminoglycans，GAGs），又名氨基多糖、酸性粘多糖，是蛋白聚糖整體分子結構中的“含糖片段”，其二糖單位為氨基己糖和己糖醛酸?，F(xiàn)今確定的糖胺聚糖結構共七種，即硫酸軟骨素C（CSC）、硫酸軟骨素A（CSA）、透明質酸（HA）、硫酸皮膚素（DS）
5、、硫酸角質素（KS）、肝素（HP）及硫酸乙酰肝素（HS）。研究表明，海洋貝類肉中糖胺聚糖具有多種生物活性，如增強免疫[3]、保濕作用[4]、抗腫瘤[5]、降血脂[6]、抗氧化[7]等活性，已有學者對翡翠貽貝[3]、近江牡蠣[6]、波紋巴非蛤[8]、四角蛤蜊[9]等多種貝類糖胺聚糖的分離純化和理化性質進行了探討。響應面法（ResponseSurfaceMethodology，RSM）是結合數(shù)學方法和統(tǒng)計方法對所感興趣的響應值受多個變量影響的問題進行建模和分析的，其目的是優(yōu)化該響應值[10]。響應面法是一種確定最
6、佳提取條件的簡單有效方法，計算機能夠生成非線性二次式模型[11]，包括中心復合設計和一個二階多項式方程，來確定不同變量對響應值影響的顯著性[12]。本文在前期研究的基礎上[13]，利用響應面法優(yōu)化合浦珠母貝肉中糖胺聚糖提取的工藝條件，為進一步的生物活性研究提供基礎。1材料與方法1.1原材料與試劑合浦珠母貝貝肉全臟器，購自廣東省徐聞縣，貝肉取出后-18℃冷凍備用。枯草桿菌中性蛋白酶（酶活力100U/mg）、胰蛋白酶（酶活力250U/mg）、木瓜蛋白酶（酶活力800U/mg），購自廣州齊云生物技術有限公司；肝素鈉
7、（效價150U/mg）、1,9-二甲基亞甲基藍，購自Sigma；硫酸軟骨素鈉，購自中國食品藥品檢定研究院；甘氨酸、NaCl、NaAc、氯仿、正丁醇、無水乙醇均為分析純。1.2儀器設備高速組織搗碎機；小型切向流超濾系統(tǒng)，美國MILLIPORE；pH計，梅特勒-托利多儀器（上海）公司；Milli-Q超純水機，美國MILLIPORE；J26XP高速離心機，美國貝克曼庫特；紫外可見分光光度計，日本SHIMADZU；Alpha1-4冷凍干燥機，德國Christ；隔膜真空泵（GM-0.33B）；TLJ-2型定時增力電動攪
8、拌器，姜堰市天力醫(yī)療器械有限公司；HWS24電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科學儀器有限公司；旋轉蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；CBS-B程控多功能全自動部份收集器和BT-100SD定時電腦泵，上海青浦滬西儀器廠。1.3方法1.3.1粗提工藝合浦珠母貝全臟器→解凍→加水勻漿→熱水浸提→酶解→煮沸滅酶→10000rpm離心10min，sevage法除蛋白→清液調pH至7.0，65%乙醇4℃醇沉24h→離心分離沉
