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《活體動(dòng)物光學(xué)成像系統(tǒng)在活體熒光成像中的應(yīng)用》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、活體動(dòng)物光學(xué)成像系統(tǒng)在活體熒光成像中的應(yīng)用第一部分技術(shù)原理一、??技術(shù)簡(jiǎn)介隨著活體動(dòng)物光學(xué)成像技術(shù)在國(guó)內(nèi)外的普及和應(yīng)用,越來(lái)越多的科研人員希望能通過(guò)該技術(shù)來(lái)觀察活體動(dòng)物體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)以及對(duì)藥物治療的反應(yīng),希望能觀察到熒光標(biāo)記的多肽、抗體、小分子藥物在體內(nèi)的分布和代謝情況。NightOWLⅡLB983NC320活體動(dòng)物光學(xué)成像系統(tǒng)正是為滿足這樣的應(yīng)用需求而設(shè)計(jì)的。該系統(tǒng)通過(guò)熒光光路的特殊設(shè)計(jì),實(shí)現(xiàn)了對(duì)激發(fā)光的能量控制和調(diào)節(jié),提高了活體熒光成像的穩(wěn)定性和靈敏度,并且該系統(tǒng)操作簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉、不涉及放射性,是不錯(cuò)的進(jìn)行活體熒光成像的儀器。與傳統(tǒng)技術(shù)相比,活體熒光成像技術(shù)不需要?dú)⑺绖?dòng)
2、物,可以對(duì)同一個(gè)動(dòng)物進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)跟蹤成像,既可以提高數(shù)據(jù)的可比性,避免個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。更重要的是,該技術(shù)可以得到直觀的成像圖片,了解標(biāo)記物在動(dòng)物體內(nèi)的分布和代謝情況,避免了傳統(tǒng)的體外實(shí)驗(yàn)方法的諸多缺點(diǎn),特別是在藥物制劑學(xué)、藥物臨床前研究中有不可估量的應(yīng)用前景。NightOWLⅡLB983NC320活體熒光體內(nèi)成像技術(shù)的基本原理是激發(fā)光源通過(guò)特殊的光路設(shè)計(jì)使其能量穩(wěn)定、強(qiáng)度合適的激發(fā)光使熒光基團(tuán)達(dá)到較高的能量水平,然后發(fā)射出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的散射光,該散射光可以穿透實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的組織并且可由儀器coolingslowscaning活體動(dòng)物光學(xué)成像系統(tǒng)在活體熒光成像中的應(yīng)用第一部分技
3、術(shù)原理一、??技術(shù)簡(jiǎn)介隨著活體動(dòng)物光學(xué)成像技術(shù)在國(guó)內(nèi)外的普及和應(yīng)用,越來(lái)越多的科研人員希望能通過(guò)該技術(shù)來(lái)觀察活體動(dòng)物體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)以及對(duì)藥物治療的反應(yīng),希望能觀察到熒光標(biāo)記的多肽、抗體、小分子藥物在體內(nèi)的分布和代謝情況。NightOWLⅡLB983NC320活體動(dòng)物光學(xué)成像系統(tǒng)正是為滿足這樣的應(yīng)用需求而設(shè)計(jì)的。該系統(tǒng)通過(guò)熒光光路的特殊設(shè)計(jì),實(shí)現(xiàn)了對(duì)激發(fā)光的能量控制和調(diào)節(jié),提高了活體熒光成像的穩(wěn)定性和靈敏度,并且該系統(tǒng)操作簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉、不涉及放射性,是不錯(cuò)的進(jìn)行活體熒光成像的儀器。與傳統(tǒng)技術(shù)相比,活體熒光成像技術(shù)不需要?dú)⑺绖?dòng)物,可以對(duì)同一個(gè)動(dòng)物進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)跟蹤成像,既可以提
4、高數(shù)據(jù)的可比性,避免個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。更重要的是,該技術(shù)可以得到直觀的成像圖片,了解標(biāo)記物在動(dòng)物體內(nèi)的分布和代謝情況,避免了傳統(tǒng)的體外實(shí)驗(yàn)方法的諸多缺點(diǎn),特別是在藥物制劑學(xué)、藥物臨床前研究中有不可估量的應(yīng)用前景。NightOWLⅡLB983NC320活體熒光體內(nèi)成像技術(shù)的基本原理是激發(fā)光源通過(guò)特殊的光路設(shè)計(jì)使其能量穩(wěn)定、強(qiáng)度合適的激發(fā)光使熒光基團(tuán)達(dá)到較高的能量水平,然后發(fā)射出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的散射光,該散射光可以穿透實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的組織并且可由儀器coolingslowscaningCCD以光子數(shù)量化檢測(cè)到光強(qiáng)度,同時(shí)反應(yīng)出標(biāo)記物的數(shù)量。二、??標(biāo)記原理活體熒光成像技術(shù)有三種標(biāo)記方法:
5、熒光蛋白標(biāo)記、熒光染料標(biāo)記和量子點(diǎn)標(biāo)記。熒光蛋白適用于標(biāo)記腫瘤細(xì)胞、病毒、基因等。通常使用的是GFP、EGFP、RFP(DsRed)等。熒光染料標(biāo)記和體外標(biāo)記方法相同,常用的有Cy3、Cy5、Cy5.5及Cy7,可以標(biāo)記抗體、多肽、小分子藥物等。量子點(diǎn)標(biāo)記作為一種新的標(biāo)記方法,是有機(jī)熒光染料的發(fā)射光強(qiáng)的20倍,穩(wěn)定性強(qiáng)100倍以上,具有熒光發(fā)光光譜較窄、量子產(chǎn)率高、不易漂白、激發(fā)光譜寬、顏色可調(diào),并且光化學(xué)穩(wěn)定性高,不易分解等諸多優(yōu)點(diǎn)。量子點(diǎn)是一種能發(fā)射熒光的半導(dǎo)體納米微晶體,尺寸在100nm以下,外觀恰似一極小的點(diǎn)狀物。它可以經(jīng)受反復(fù)多次激發(fā),而不像有機(jī)熒光染料那樣容易發(fā)生熒光
6、淬滅。已經(jīng)證實(shí)了量子點(diǎn)的成像深度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的熒光素如果能與抗體結(jié)合配對(duì),就可以作為跟蹤組織細(xì)胞的探針,或者探測(cè)低濃度的抗體。如果能解決不同材料的量子點(diǎn)偶聯(lián)、功能化標(biāo)記問(wèn)題,就可以用量子點(diǎn)代替很多熒光染料分子。三、??技術(shù)特性在活體動(dòng)物光學(xué)成像技術(shù)中,相對(duì)于生物發(fā)光成像技術(shù),熒光成像技術(shù)的優(yōu)勢(shì)主要表現(xiàn)在:1.??熒光染料、蛋白標(biāo)記能力強(qiáng)熒光標(biāo)記物種類(lèi)繁多,包括熒光蛋白、熒光分子、量子點(diǎn)等,可以與基因、多肽、抗體等生物分子標(biāo)記,作為分子探針使用范圍廣。同時(shí)不同的熒光蛋白或染料還可對(duì)樣本進(jìn)行多重標(biāo)記,同時(shí)成像。檢測(cè)的波長(zhǎng)范圍從300nm到1100nm,我們可以提供全光譜的濾光片實(shí)現(xiàn)幾
7、乎所有熒光標(biāo)記的體內(nèi)成像。2.??信號(hào)強(qiáng)度大由于熒光是在外界光源激發(fā)下產(chǎn)生的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象,其光子強(qiáng)度較其它光學(xué)信號(hào)更強(qiáng),持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),信號(hào)所反應(yīng)的樣本信息量更豐富,對(duì)信號(hào)接收儀器的要求相對(duì)較低,節(jié)省更多的實(shí)驗(yàn)成本。3.??實(shí)驗(yàn)成本低相對(duì)于活體生物發(fā)光成像來(lái)說(shuō),費(fèi)用低廉,不需要底物。熒光發(fā)光基團(tuán)只要在其合適強(qiáng)度的激發(fā)光激發(fā)下就可以發(fā)出定波長(zhǎng)的發(fā)射光信號(hào),整個(gè)反映不需要添加任何昂貴的反應(yīng)成分,只要保證熒光基團(tuán)穩(wěn)定,就可實(shí)現(xiàn)隨時(shí)激發(fā)隨時(shí)發(fā)光的效果。4.??活體、尸體、器官全部可以進(jìn)行成像