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《GBT 13111-1991 谷物和大豆中赫曲霉毒素A的測定方法》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中華人民共和國國家標準谷物和大豆中儲曲霉毒素AGB13111一91的測定方法MethodfordeterminationofochratoxinAincerealandbean1主腸內容與適用范圍本標準規(guī)定了谷物和大豆中褚曲霉毒素A的薄層色譜測定方法。本標準適用于小麥、玉米和大豆中摘曲霉毒素A的測定。在薄層板上豬曲霉毒素A的最低檢出量為4ng。本方法的最低檢測量為10lag/kg,2原理用三氯甲烷-0.1mol/L磷酸或石油醚一甲醉/水提取樣品中的緒曲霉毒素A，樣品提取液經液一液分配后，根據(jù)其在365nm紫外光燈下產生黃綠色熒光，在薄層色譜板上與標準比較測定含量
2、。3試荊以下試劑除特殊規(guī)定外均為分析純試劑，水為蒸餾水或同等純度的水。3.1石油醚(6090℃或30-60'C).3.2甲醉。3.3三抓甲烷。3-4甲苯。3.5乙酸乙醋。3.6甲酸。3.7冰乙酸。3.8乙醚。3.9苯一乙睛(98，2),3.100.1mol/L磷酸〔c(H,PO,)=0.1mol/L);稱取11.5g磷酸(85%)加水稀釋至1000mLa3.112mol/L鹽酸溶液Cc(HCl)=2mol/L);量取20mL鹽酸，加水稀釋至120mL,3.124%氛化鈉溶液。3.130.1mol/1,碳酸氫鈉溶液(c(NaHC03)一0.1mol/L):稱取8.
3、4g碳酸氫鈉，加適量水溶解，并用水稀釋至1000mL,3.14硅膠G:薄層層析用。3.15曲霉毒素A(以下簡稱OA)標準溶液:用笨一冰乙酸(99，1)配成40Kg/mL儲曲霉毒素A貯備液，并用紫外分光光度計測定其濃度。濃度的測定參照GB5009.22《食品中黃曲霉毒素B,的測定方法》中2.14條(赫曲霉毒素A的最大吸收峰波長333nm，分子量403，克分子消光系數(shù)值為5550),精密吸型道,竺塑竺竺過竺些塑7A0.5些,些型墮塑些嗯竺翌竺竺魚=一中華人民共和國衛(wèi)生部199卜06一07批準1992一03一01實施GB13111一914儀器所有玻璃儀器均需用稀鹽酸浸
4、泡，用自來水、燕餾水沖洗。4.1小型粉碎機。4.2電動振蕩器。4.3玻璃板:5cmX20cm,4.4薄層涂布器。4.5展開槽:內長25cm,寬6cm,高4cm,4.6紫外光燈:365nm,4.7微量注射器:10pL,50pL,4.8具0.2mL尾管的10mL小濃縮瓶。5分析步驟5.1提取5.1.1甲法稱取20g粉碎并通過20目篩的樣品，置于200mL具塞錐形瓶中，加入100mL三氯甲烷和10mL0.1mol/L磷酸，振蕩30min后通過快速定性濾紙過濾，取20mL濾液置于250mL分液漏斗中，加50mL0.1mol/L碳酸氫鈉溶液振搖2min，靜置分層后，將三抓
5、甲烷層放入另一個100mL分液漏斗中(少量乳化層，或即使三抓甲烷層全部乳化都可放入分液漏斗中)，加入50mLO.1mol/L碳酸氫鈉溶液重復提取三抓甲烷層，靜置分層后棄去三氯甲烷層(如三氛甲烷層仍乳化，棄去，不影響結果)。碳酸氫鈉水層并入第一個分液漏斗中，加約5.5mL2mol/L鹽酸溶液調節(jié)pH2-3(用pH試紙測試)，加入25mL三氛甲烷振搖2min，靜置分層后，放三氛甲烷層于另一盛有100mL水的250mL分液漏斗中，酸水層再用10mL三抓甲烷振搖、提取、靜置，將三抓甲烷層并人同一分液漏斗中。振搖、靜置分層，用脫脂棉擦干分液漏斗下端，放三抓甲烷層于一75m
6、L燕發(fā)皿中，將燕發(fā)皿置燕汽浴上通風揮干。用約8mL三氯甲烷分次將燕發(fā)皿中的殘渣溶解，轉入具尾管的10mL濃縮瓶中，置80℃水浴鍋上用蒸汽加熱吹氮氣(NO，濃縮至干，加入。.2mL苯一乙睛(98:2)溶解殘渣，搖勻，供薄層色譜點樣用。5.1.2乙法稱取20g粉碎并通過20目篩的樣品加于200mL具塞錐形瓶中，加30mL石油醚和100mL甲醉一水(55:45)，在瓶塞上抹上一層水蓋嚴防漏。振蕩30min后，通過快速定性濾紙濾入分液漏斗中，待下層甲醉水層分清后，取出20mL濾液置于100mL分液漏斗中，用pH試紙測試，一般為pH5-6。加入25mL三抓甲烷振搖2min
7、，靜置分層后放出三抓甲烷層于另一分液漏斗中，再用10mL三氯甲烷重復振搖提取甲醉一水層(在用三抓甲烷振搖提取時，如發(fā)生乳化現(xiàn)象，可滴加甲醇促使其分層)，將三氯甲烷層合并于同一分液漏斗中，加入50-100mL40o抓化鈉溶液(加入量視品種不同而異，大豆加100mL,小麥、玉米則加50mL左右)，振搖放置(如為大豆樣品提取液還須輕輕反復倒轉分液漏斗，使乳化層逐漸上升。如乳化嚴重可加入少許甲醉)，待三氯甲烷層澄清后，用脫脂棉擦干分液漏斗下端，放三氯甲烷層于75mL燕發(fā)皿中(如為大豆樣品須再加人10mL三抓甲烷振搖，三抓甲烷層合并于同一燕發(fā)皿中)，將蒸發(fā)皿置燕汽浴上通風
8、揮干。以下操作自“用約8
