海島棉染色體組特異重復序列的篩選與亞克隆分析

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1、目錄摘要?????????????????????IAbstract????????????????????.Ⅲ縮略語表????????????????????.V第一章:文獻綜述??????????????????11.1重復序列的種類?????????????????.11.1.1串聯(lián)重復序列?????????????????11.1.1.1端粒重復序列(TelomericRepeats)?????????.11.1.1.2核糖體RNA基因???????????????11.1.1.3著絲粒串聯(lián)重復序列家族???

2、?????????.21.1.1.4亞端?;虮坶g衛(wèi)星DNA家族???????????..31.1.2散布重復序列?????????????????31.1.2.1轉(zhuǎn)座因子(transposableelements)????????..41.1.2.2反轉(zhuǎn)錄因子(retroelements)??????????..41.1.2.3短散布核因子(SINEs)????????????..51.1.2.4其它散布重復序列??????????????.51.2重復序列的功能與應用?????????????.??61.3重復序列

3、的分離和克隆方法??????????????81.3.1超高速離心法?????????????????81.3.2重復序列中單酶切位點的酶酶切基因組法?????????81.3.3重復序列特異結(jié)合免疫蛋白法????????????.91.3.4BAC或其它文庫篩選法??????????????.91.4棉屬中重復序列的研究概況?????????????..101.4.1棉屬植物基因組簡介??????????????..101.4.2棉花重復序列的同步進化?????????????.101.4.2.118S-26SrD

4、NA的同步進化???????????..111.4.2.25SrDNA的同步進化?????????????.111.4.2.3基因組的同步進化??????????????111.5植物熒光原位雜交的原理及其發(fā)展???????????..121.5.1熒光原位雜交技術(shù)的原理?????????????.121.5.2熒光原位雜交技術(shù)的發(fā)展?????????????.121.5.3熒光原位雜交技術(shù)的分類?????????????.131.5.4熒光原位雜交在植物研究中的應用??????????..141.6菌落原位雜交??

5、????????????????151.7本研究目的與意義????????????????..16第二章材料與方法?????????????????..172.1實驗材料???????????????????.172.1.1BAC文庫??????????????????.172.1.2實驗所用靶DNA????????????????.172.1.3試劑???????????????????.182.2試驗方法???????????????????.182.2.1DNA提取??????????????????.182.

6、2.1.1Pima-90基因組DNA提取????????????.182.2.1.2BACDNA提取???????????????.192.2.2菌落原位雜交????????????????..202.2.2.1高密度雜交膜的制備?????????????..202.2.2.2探針的標記????????????????.212.2.2.3Southern雜交???????????????.2l2.2.3熒光原位雜交????????????????..222.2.3.1體細胞染色體制片??????????????.22

7、2.2.3.2探針的標記????????????????.222.2.3.3原位雜交流程???????????????..232.2.4亞克隆??????????????????..242.2.4.1BACDNA部分酶切??????????????.242.2.4.2目的DNA片段的試劑盒回收???????????..242.2.4.3回收產(chǎn)物的鏈接???????????????252.2.4.4連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化???????????????252.2.4.5重組克隆的分析???????????????262.2.4.

8、6克隆的挑取和保存??????????????.262.2.5陽性克隆的序列測定??????????????..26第三章實驗結(jié)果與分析??????.??????????283.1棉花重復序列的篩選及染色體定位????????????283.1.1BAC文庫的篩選及得到的陽性克隆??????????..283.1.2陽性單克隆的原位雜交????

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