液相色譜柱的使用與維護(hù)

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1、液相色譜柱的使用與維護(hù)WatersCBUMarketing王欣玲Xinling_wang@waters.com?2015WatersCorporation1目錄?正確使用_柱效測(cè)試_色譜柱的平衡_色譜柱的清洗_色譜柱的保護(hù)_色譜柱的保存?色譜柱常見(jiàn)故障_柱效下降_基線問(wèn)題_保留時(shí)間改變_峰型問(wèn)題?2015WatersCorporation2目錄?正確使用_柱效測(cè)試_色譜柱的平衡_色譜柱的清洗_色譜柱的保護(hù)_色譜柱的保存?色譜柱常見(jiàn)故障_柱效下降_基線問(wèn)題_保留時(shí)間改變_峰型問(wèn)題?2015WatersCorporation3了解你的色譜柱：色譜柱維護(hù)使用指南書(shū)(網(wǎng)站下載)

2、填裝良好的色譜柱在系統(tǒng)、連接狀況皆良好的狀況下，色譜峰形很好?2015WatersCorporation4色譜柱的安裝?色譜柱可能已經(jīng)發(fā)生：–溶劑部分揮發(fā)，柱床部分干涸–常用C18柱發(fā)生干涸時(shí)：如果操作正確，可將柱恢復(fù)至應(yīng)有柱效?好的操作習(xí)慣：–僅連接柱入口端、純有機(jī)溶劑、低流速：檢查是否存在柱干涸情況–如存在柱干涸：充分排除柱內(nèi)氣泡，避免進(jìn)入檢測(cè)器–如存在柱干涸：繼續(xù)用純有機(jī)溶劑、低流速浸潤(rùn)柱，避免柱壓驟升?2015WatersCorporation5色譜柱的安裝HPLC柱，粒徑5um，內(nèi)徑4.6mm時(shí)：UPLC柱，1.7或1.8um，內(nèi)徑2.1mm時(shí)：（UPLC柱體

3、積小，更容易發(fā)生溶劑揮發(fā)柱床干涸的問(wèn)題）???2015WatersCorporation6測(cè)試色譜柱的柱效不測(cè)試柱效的“后果”：-如柱效不佳，將浪費(fèi)對(duì)實(shí)際樣品的分析測(cè)試時(shí)間、問(wèn)題排查時(shí)間，甚至寶貴樣品；-對(duì)于新柱，如柱效不佳，難以判斷是否是樣品或流動(dòng)相污染所造成；-建議新柱在到貨后，即進(jìn)行柱效測(cè)試，如有疑問(wèn)，及時(shí)與供應(yīng)商聯(lián)系排查。?2015WatersCorporation7影響色譜柱柱效表達(dá)的系統(tǒng)因素影響柱效的系統(tǒng)因素：-系統(tǒng)死體積，包括系統(tǒng)中過(guò)長(zhǎng)（摘自SunFire維護(hù)使用說(shuō)明書(shū)）冗余的管路、或管路內(nèi)徑過(guò)大不合適，等等；-不合適的管路與柱的連接；-檢測(cè)器采樣頻率過(guò)低

4、。（摘自ACQUITYUPLC維護(hù)使用說(shuō)明書(shū)）?2015WatersCorporation8新柱柱效測(cè)定結(jié)果系統(tǒng)對(duì)柱效的影響塔板數(shù)是反映色譜柱以及儀器性能狀態(tài)的關(guān)鍵參數(shù)相同色譜柱AB12,0007,000儀器A：儀器B：譜帶展寬較小（70μL）譜帶展寬較大（130μL）測(cè)出的塔板數(shù)較高（12,000）測(cè)出的塔板數(shù)較低（7,000）?2015WatersCorporation9柱外譜帶展寬的機(jī)械因素?進(jìn)樣體積注意：譜帶最早由進(jìn)樣器產(chǎn)生?進(jìn)樣器（密封墊問(wèn)題）}?連接管線，特別是：–進(jìn)樣器至色譜柱注意：這是最常見(jiàn)的問(wèn)題–色譜柱至檢測(cè)器?接頭及篩板?檢測(cè)器的檢測(cè)池體積?色譜柱本

5、身–色譜柱內(nèi)的死體積–篩板阻塞?2015WatersCorporation10實(shí)例：管線內(nèi)徑對(duì)柱效的影響—在色譜柱與進(jìn)樣器之間使用不同內(nèi)徑的管線上圖是用0.009″內(nèi)徑的管路連接時(shí)測(cè)柱效的色譜圖：柱效：1,1000下圖是用0.04″內(nèi)徑的管路連接時(shí)測(cè)柱效的色譜圖：柱效：4000注：使用相同色譜柱?2015WatersCorporation11實(shí)例：管線內(nèi)徑對(duì)柱效的影響?連接管線的內(nèi)徑對(duì)系統(tǒng)譜帶展寬的影響0.009"0.040"0.020"?注：過(guò)長(zhǎng)的管線亦會(huì)造成較大的譜帶展寬樣品譜帶在管線內(nèi)發(fā)生了擴(kuò)散?2015WatersCorporation12色譜柱安裝及連接的機(jī)械

6、因素-連接連接適當(dāng)連接不妥，造成漏液連接不妥譜帶展寬由于色譜柱連接不當(dāng)引起的譜帶展寬，機(jī)械問(wèn)題?2015WatersCorporation13測(cè)試柱效一、了解色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常二、將檢測(cè)結(jié)果小心保存，當(dāng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常時(shí)，再檢測(cè)柱效進(jìn)行對(duì)比，來(lái)進(jìn)一步排查原因三、按照色譜柱檢測(cè)報(bào)告方法測(cè)試色譜柱，由于色譜系統(tǒng)有差異，您的測(cè)試結(jié)果可能與色譜柱廠家實(shí)驗(yàn)室得到的結(jié)果有所差異，一般來(lái)說(shuō)，變化小于20%可歸因于儀器的不同四、理論塔板數(shù)可使用下面的公式估算：N=3500L/dpL代表柱長(zhǎng)，單位是cm；dp代表填料粒徑，單位是μm。新拿到一根色譜柱開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，要先測(cè)

7、試柱效?2015WatersCorporation14正確使用色譜柱-總述?樣品方面了解樣品在流動(dòng)相中的溶解度，用流動(dòng)相試樣品的溶解度，防止其在流動(dòng)相中析出了解樣品與色譜柱的基質(zhì)/填料是否相互作用?流動(dòng)相方面過(guò)濾脫氣?純度的要求超純水，梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)水中有機(jī)雜質(zhì)含量要低緩沖液的pH值必須在填料的允許范圍內(nèi)緩沖液（鹽）的濃度用色譜純?nèi)軇⑴c填料相匹配溶劑中的雜質(zhì)含量?2015WatersCorporation15色譜柱平衡/反相色譜柱?2015WatersCorporation16離子對(duì)試劑的使用?使用離子對(duì)流動(dòng)相的色譜柱–明顯需要較長(zhǎng)的平衡