實驗一斐林試劑置換法測定還原糖的含量

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1、實驗一斐林試劑置換法測定還原糖的含量一、實驗原理糖類包括多糖、雙糖和單糖，其中單糖和某些雙糖具有游離的羰基，稱為還原糖，多糖和蔗糖無還原性。利用糖的還原性，與斐林試劑（氧化劑）中的二價銅離子還原為一價銅，進行氧化還原反應，而進行測定.非還原糖必須轉(zhuǎn)化為還原糖，再進行測定。斐林試劑中酒石酸鉀鈉銅是一種氧化劑，反應的終點可用次甲基藍作指示劑，在堿性、沸騰環(huán)境下還原呈無色。根據(jù)斐林試劑完全還原所需的還原糖量，計算出樣品還原糖量。二、試劑與材料1、斐林試劑甲69.3gCuSO4.5H2O1000ml50ml/組乙346g酒石酸鉀鈉+100gNaOH1000ml50ml/組2、1%

2、次甲基藍1g次甲基藍+100ml水/班棕色瓶保存3、0.2%標準G2gG105℃烘干到恒重加水到1000ml2000ml/班4、堿式滴定管5、樣品溶液：待測G液樣品1：稀釋20倍，1000ml/班樣品2：稀釋50倍，1000ml/班6、電爐三、操作方法1、斐林試劑標定A取甲液5ml+乙液5ml，（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉淀，應將甲液加入乙液，使開始生成的氧化亞銅沉淀重溶）置于250ml三角瓶中，加入10ml水，并從滴定管中加入0.2%的標準G若干毫升（約23ml）。（量控制在后滴定時消耗G在0.5－1.0ml)B電爐上加熱至沸，并保持微沸2分鐘，加2滴1%次甲

3、基藍溶液，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液用0.2%標準G滴定至藍色消失，有紅棕色沉淀，溶液清亮為終點止。記錄耗用的G量為V0,必須在1min內(nèi)完成。注意：還原的次甲基藍易被空氣中的氧氧化，恢復成原來的藍色，所以滴定過程中必須保持溶液成沸騰狀態(tài)，并且避免滴定時間過長。2、定糖預備試驗同1法取斐林試劑，加10ml樣品液，搖勻于電爐上加熱至沸，保持微沸2分鐘，加2滴1%次甲基藍，用0.2%G滴定至藍色消失。記錄耗用的G量為V13、樣品中還原糖測定同上法吸取斐林試劑加10ml樣品液(預先稀釋)，補加（V0—V1）ml水，并從滴定管中預先加入（V1-1）ml0.2%G

4、，搖勻至電爐上加熱至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基藍，繼續(xù)用G滴定至藍色消失。記錄消耗的標準G體積為V毫升。四、結果計算還原糖含量(以G計)（g/ml)=（Vo-V)*0.002*1/10*n式中Vo--------斐林試劑標定值，mlV---------樣品糖液測定值，ml0.002-----標準GS液濃度，g/ml10--------樣品糖液體積，mln---------樣品稀釋倍數(shù)五、注意事項本方法測定的是一類具有還原性質(zhì)的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等，只是結果用葡萄糖或其他轉(zhuǎn)化糖的方式表示，所以不能誤解為還原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知樣品中只

5、含有某一種糖，如乳制品中的乳糖，則可以認為還原糖=某糖。分別用葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖標準品配制標準溶液分別滴定等量已標定的費林氏液，所消耗標準溶液的體積有所不同。證明即便同是還原糖，在物化性質(zhì)上仍有所差別，所以還原糖的結果只是反映樣品整體情況，并不完全等于各還原糖含量之和。如果已知樣品只含有某種還原糖，則應以該還原糖做標準品，結果為該還原糖的含量。如果樣品中還原糖的成分未知，或為多種還原糖的混合物，則以某種還原糖做標準品，結果以該還原糖計，但不代表該糖的真實含量。五、分析討論六、思考題：1、查閱資料還原糖測定檢測方法有哪些？其原理是什么？2、總結本實驗方法檢測還原糖應

6、注意哪些事項？