實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌革蘭氏染色

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1、實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌革蘭氏染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)微生物制片、染色的基本技術(shù)掌握細(xì)菌革蘭氏染色及無菌操作技術(shù)進(jìn)一步觀察細(xì)菌的基本形態(tài)C.Gram（革蘭）于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細(xì)菌的染色方法。二、實(shí)驗(yàn)原理革蘭氏染色1、用堿性染料結(jié)晶紫對菌液涂片進(jìn)行初染2、用碘溶液進(jìn)行媒染，其作用是提高染料和細(xì)胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固。3、用乙醇或丙酮沖洗進(jìn)行脫色。在經(jīng)歷脫色后仍將結(jié)晶紫保留在細(xì)胞內(nèi)的為革蘭氏陽性細(xì)菌，而革蘭氏陰性細(xì)菌的結(jié)晶紫被洗掉，細(xì)胞呈無色。4、用一種與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對涂片進(jìn)行復(fù)染。例如沙黃，它使原來無色的革蘭氏陰性細(xì)菌最后呈現(xiàn)桃

2、紅到紅色，而革蘭氏陽性細(xì)菌繼續(xù)保持深紫色三、實(shí)驗(yàn)材料1、菌種：大腸桿菌（E.C）、枯草桿菌（B.S）2、染料：結(jié)晶紫、復(fù)紅、碘液等3、材料：95%酒精等涂片—風(fēng)干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—脫色—水洗—復(fù)染—水洗—干燥—鏡檢四、實(shí)驗(yàn)方法菌懸液涂片干燥滴加無菌水固定取菌苔涂片SmearpreparationHeatfixingcrystalvioletstainwashwithwaterStainingCounterstainwithSafranin注意事項(xiàng)：（1）在涂片時(shí)不可過厚，否則在染色脫色時(shí)，都不易均勻，固定時(shí)，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。（2）

3、嚴(yán)格掌握脫色程度，是革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟。如脫色時(shí)間太長，陽性菌會(huì)誤為革蘭氏陰性菌，時(shí)間不足，革蘭氏陰性菌會(huì)誤為革蘭氏陽性菌。（3）在鏡檢時(shí)，以分散開的菌體的革蘭氏染色反應(yīng)為準(zhǔn)。（4）設(shè)定陰性和陽性對照，確保實(shí)驗(yàn)的可靠性。五、思考題1、講述革蘭氏染色的原理并指出E.C和B.S分別屬于革蘭氏陽性或陰性？2、觀察細(xì)菌為什么要染色？為什么細(xì)菌染色多采用堿性染料？3、做革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵一步是什么？4、當(dāng)對未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣能證明你的染色技術(shù)和結(jié)果的正確性？