臨床微生物實(shí)驗(yàn)室血培養(yǎng)操作標(biāo)準(zhǔn)

《臨床微生物實(shí)驗(yàn)室血培養(yǎng)操作標(biāo)準(zhǔn)》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、臨床微生物實(shí)驗(yàn)室血培養(yǎng)操作標(biāo)準(zhǔn)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了血培養(yǎng)標(biāo)本臨床微生物檢驗(yàn)的技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于開展血培養(yǎng)的臨床微生物實(shí)驗(yàn)室。2術(shù)語一套血培養(yǎng)：從同一穿刺點(diǎn)同時采集的血液標(biāo)本，分別注入需氧和厭氧培養(yǎng)瓶；靜脈輸液缸：一種植入皮下，可長期留置在體內(nèi)的靜脈輸液裝置；HACEK菌群：嗜沫嗜血桿菌、人心桿菌、嚙蝕艾肯菌和金氏金菌；血培養(yǎng)污染率：一般由凝固酶陰性葡萄球菌、革蘭陽性棒狀桿菌、座瘡丙酸桿菌和微球菌等污染引起的陽性瓶占總送檢瓶數(shù)的比例。3導(dǎo)言人體血液中有很多物質(zhì)，包括溶菌酶、白細(xì)胞、免疫球蛋白、補(bǔ)體等，可在幾分

2、鐘內(nèi)將入侵血流的微生物清除。當(dāng)微生物感染超出人體免疫系統(tǒng)的防御能力時，人體將不能將微生物局限于原始感染的部位，或在治療中不能通過切除、引流等措施清除感染源，那這些微生物將侵入血液迅速繁殖形成菌血癥或真菌血癥。一過性菌血癥常發(fā)生于對感染病灶的外科處理、黏膜的創(chuàng)傷操作和易污染的外科手術(shù)，亦可發(fā)生于感染性心內(nèi)膜炎等血管內(nèi)膜感染以及傷寒和波浪熱的最初幾周。菌血癥是臨床急癥，應(yīng)盡快采集血液進(jìn)行培養(yǎng)。血培養(yǎng)是對入住急診科、ICU患者、移植患者以及靜脈插管患者的敗血癥進(jìn)行早期診斷的一種方法，并根據(jù)陽性血培養(yǎng)病原菌的藥物敏感

3、性試驗(yàn)，可為臨床醫(yī)生提供最佳的抗菌藥物治療方案，對降低病死率有很大的幫助，血培養(yǎng)對于臨床診斷和預(yù)后評估也有重要的意義。4血樣采集和培養(yǎng)瓶接種4.1采血指征可疑感染患者出現(xiàn)以下一種或幾種特征時，可考慮采集血培養(yǎng)：發(fā)熱（≥38℃）或低溫（≤36℃）寒戰(zhàn)，白細(xì)胞計數(shù)增多（計數(shù)>10.0×109/L，特別有“核左移”時）或減少（計數(shù)<3.0×109/L）,皮膚黏膜出血，昏迷，多器官衰竭，血壓降低，C反應(yīng)蛋白、降鈣素原（PCT）、1，3－β－D－葡萄糖（G試驗(yàn)）升高及突然發(fā)生的急性呼吸、體溫和生命體征改變。4.2采血時

4、間及套數(shù)154.2.1采血時間推薦在寒戰(zhàn)或高熱高峰前后采集，用抗菌藥物之前采集。4.2.2血培養(yǎng)套數(shù)應(yīng)同時采集2~3套培養(yǎng)瓶，2~5天內(nèi)無需重復(fù)采集血培養(yǎng)。只有在懷疑感染性心內(nèi)膜炎或其它血管內(nèi)感染（如導(dǎo)管相關(guān)性感染）時，才能必要間隔多次采集血培養(yǎng)。對于新生兒，采集一瓶兒童需氧瓶，建議同時做尿液和腦脊液培養(yǎng)。4.3采血量成人每瓶采血量8~10ml，兒童1~15ml，但不應(yīng)超過患兒總血量的1％。血液和肉湯之比為1：5~1：10。新生兒0.5ml。4.4需氧瓶和厭氧瓶間的血液分配4.4.1采血量充足的患者推薦配套采

5、集需氧瓶和厭氧瓶，將血液先注入?yún)捬跗浚笞⑷胄柩跗俊?.4.2采血量不足的患者應(yīng)將足量血標(biāo)本先注入需氧瓶，再將剩余血液注入?yún)捬跗?。有利于分離出真菌、銅綠假單胞菌和嗜麥芽窄食單胞菌。4.5血培養(yǎng)采集程序4.5.1采集血培養(yǎng)標(biāo)本之前首先做好手衛(wèi)生。靜脈穿刺點(diǎn)選定后，去除血培養(yǎng)的朔料瓶帽，切勿打開金屬封口環(huán)和膠塞，使用70％異丙醇或75％乙醇消毒，自然干燥60s；4.5.2在穿刺前或穿刺期間，防止靜脈滑動，可戴無菌乳膠手套固定靜脈；4.5.3穿刺點(diǎn)皮膚消毒；4.5.3.1三步法1）75％酒精擦拭靜脈穿刺部位，待干3

6、0s以上；2）1％~2％碘酊作用30s或10％碘伏60s，從穿刺點(diǎn)向外畫圈消毒至消毒區(qū)域直徑達(dá)3cm以上；3）75％酒精脫碘：對碘過敏的患者，用75％酒精消毒60s,待酒精揮發(fā)干燥后采血。穿刺點(diǎn)消毒后不可再接觸。154.5.3.2一步法：0.5％葡萄糖酸洗必泰作用30s（不適用于2個月以內(nèi)的新生兒），或70％異丙醇消毒后自然干燥。4.5.4用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭（如果行第二次穿刺，換針頭），直接注入血培養(yǎng)瓶，不可將抗凝血注入商品化培養(yǎng)瓶。4.5.5血液接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固。4.5

7、.6完成工作后洗手。5血培養(yǎng)瓶運(yùn)送血培養(yǎng)瓶應(yīng)盡快送至實(shí)驗(yàn)室孵育或上機(jī)，如果運(yùn)送延遲，應(yīng)在血液接種后盡快35~37℃孵育，切勿冷藏或冷凍。如果病房沒有孵箱，血培養(yǎng)瓶應(yīng)置于室溫，而非冷藏或冷凍。6血培養(yǎng)標(biāo)本的接受收與拒收標(biāo)準(zhǔn)6.1實(shí)驗(yàn)室工作人員在收到標(biāo)本之后應(yīng)觀察血培養(yǎng)瓶生長指示信號，如果指示有細(xì)菌生長，則應(yīng)進(jìn)行涂片鏡檢。6.2血培養(yǎng)瓶一般不予拒收，如發(fā)現(xiàn)以下情況：血培養(yǎng)瓶標(biāo)識錯誤或沒有標(biāo)識，破碎，損壞，滲漏，凝血等情況，應(yīng)及時與臨床聯(lián)系。7實(shí)驗(yàn)室操作方法及流程7.1影響檢出率的關(guān)鍵因素7.1.1培養(yǎng)基胰酶消化的

8、大豆肉湯（TSB）是應(yīng)用最廣泛的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，腦心浸液、哥倫比亞布魯氏、硫醇基乙酸鹽和添加蛋白胨肉湯也是較常見的用于需氧菌和厭氧菌的培養(yǎng)基。Middlebrook肉湯可增強(qiáng)分枝桿菌的復(fù)蘇能力。7.1.2添加劑抗凝劑茴香腦磺酸鈉（SPS），能中和溶菌酶，抑制吞噬作用，使部分氨基糖苷類失活，抑制部分補(bǔ)體串聯(lián)。濃度為0.025~0.0515％，有些濃度低到0.006％。SPS會抑制部分細(xì)菌生長，包括奈瑟菌屬