《藥物分析》PPT課件(I)

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1、第十三章生化藥物和基因工程藥物分析概論返回主目錄基本要求1．掌握本類(lèi)藥物質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法類(lèi)型。2．掌握HPLC法和酶活力測(cè)定法在本類(lèi)藥物測(cè)定中的應(yīng)用。3．熟悉本類(lèi)藥物的范圍、種類(lèi)、質(zhì)量控制的要點(diǎn)。4．了解本類(lèi)藥物含量測(cè)定的其他方法。返回一、藥物分類(lèi)第一節(jié)概述1．生化藥物：例：氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶等。2.基因工程藥物：以DNA重組技術(shù)生產(chǎn)的蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、疫苗、單克隆抗體和細(xì)胞生長(zhǎng)因子類(lèi)藥物。DNA重組技術(shù)（基因工程）：生產(chǎn)過(guò)程為天然基因合成的核苷酸序列內(nèi)切酶連接酶載體重組的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞增殖、表達(dá)分離純化目的產(chǎn)物二、種類(lèi)氨基

2、酸、多肽與蛋白質(zhì)類(lèi)酶類(lèi)與輔酶類(lèi)多糖類(lèi)脂質(zhì)類(lèi)核酸及其降解物和衍生物類(lèi)藥物1．生化藥物2．基因工程藥物的種類(lèi)1）激素類(lèi)及神經(jīng)遞質(zhì)類(lèi)藥物：人生長(zhǎng)激素釋放抑制因子、人胰島素、人生長(zhǎng)激素2）細(xì)胞因子類(lèi)藥物：人干擾素人白細(xì)胞介素、集落刺激因子、促紅細(xì)胞生成素3）酶類(lèi)及凝血因子類(lèi)藥物三、特點(diǎn)1.生物體的基本生化成分2.分子量大:分子量測(cè)定3.結(jié)構(gòu)難確證4.全過(guò)程的質(zhì)量控制：原料、生產(chǎn)過(guò)程、最終產(chǎn)品5.生物活性檢查6.安全性檢查7.效價(jià)（含量）測(cè)定：理化法：有效成分的含量效價(jià)測(cè)定和酶活力測(cè)定：有效成分的生物活性返回生化藥物和基因藥物質(zhì)量控制的項(xiàng)目：來(lái)源與種類(lèi)純

3、度性狀干燥失重或水分鑒別熾灼殘?jiān)?氨酸組分分析生物活性肽圖熱源試驗(yàn)糖含量含量分析第二節(jié)質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法一、鑒別理化鑒別法：化學(xué)鑒別法紫外分光光度法HPLC法生化鑒別法：酶法電泳法等電聚焦法生物鑒別法：家兔驚厥試驗(yàn)（一）理化鑒別法1.化學(xué)鑒別法：例：溶菌酶-CONH-+Cu2+絡(luò)合顯色2.紫外分光光度法溶劑：0.01mol/L鹽酸例：三磷酸腺苷二鈉濃度：20μg/ml判斷：λmax：257±1nmA250/A260：0.17～0.27。3.HPLC法：利用對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖的保留時(shí)間和肽圖譜的一致性進(jìn)行鑒別。4.酶法：例

4、：尿激酶的鑒別---氣泡上升法原理：方法：取小試管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纖維蛋白原溶液，再依次加入牛纖維蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，迅速搖勻，立即置37℃±0.5℃恒溫水浴保溫，記時(shí)。反應(yīng)系統(tǒng)在30～40秒內(nèi)凝結(jié)，凝結(jié)塊內(nèi)有氣泡生成，15分鐘內(nèi)凝結(jié)塊溶解，當(dāng)凝結(jié)塊溶解時(shí)，氣泡逐漸上升。以0.9%氯化鈉作空白，同法操作，凝結(jié)塊在2小時(shí)內(nèi)不溶。5.電泳法：以肝素鑒別為例。與國(guó)家肝素標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，其移動(dòng)位置相應(yīng)。6.生物法：利用生物體進(jìn)行試驗(yàn)來(lái)鑒別藥物。例：家兔驚厥試驗(yàn)鑒別胰島素。利用胰島素的降糖作用。給家兔大劑量注射胰島素，家兔驚厥，迅速靜注50%GS，

5、驚厥停止。（二）雜質(zhì)檢查一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查：原料藥純度分析生產(chǎn)過(guò)程中雜質(zhì)的檢查1.原料藥純度分析：多糖類(lèi)-----低聚糖、核酸、蛋白質(zhì)酶類(lèi)藥物-----酶催化反應(yīng)基本產(chǎn)物的分析，具有一定活性的其他有關(guān)酶的檢查。例：胰蛋白酶中糜蛋白酶的檢查選用N-乙酰-L-酪氨酸乙酯作底物進(jìn)行糜蛋白酶的限度檢查。糜蛋白酶的限度為2500個(gè)胰蛋白酶單位中不得大于50單位，按每1mg胰蛋白酶為2500個(gè)單位和每1mg糜蛋白酶為1000單位，折算成重量，則糜蛋白酶的限度為5%（g/g）。1:1000=x:50x=0.05（mg）L=0.05/1=5%2.生產(chǎn)過(guò)程

6、中雜質(zhì)的檢查（三）安全性試驗(yàn)熱源試驗(yàn)異常毒性試驗(yàn):急性毒性物質(zhì)過(guò)敏試驗(yàn)：異性蛋白降壓物質(zhì)試驗(yàn)：導(dǎo)致血壓降低的雜質(zhì)、組胺、類(lèi)組胺無(wú)菌試驗(yàn)：活菌基因工程藥物中可能雜質(zhì)與污染物檢查來(lái)源于宿主細(xì)胞的殘留DNA，外源性雜質(zhì)致突變?cè)囼?yàn)生殖毒性試驗(yàn)（四）含量測(cè)定生化藥物和基因藥物的含量表示方法：百分含量：適用于結(jié)構(gòu)明確的小分子藥物或經(jīng)水解后變成小分子的藥物。生物效價(jià)或酶活力單位：適用于酶類(lèi)、蛋白質(zhì)類(lèi)藥物。含量測(cè)定方法：理化分析法：化學(xué)分析法：重量測(cè)定法、滴定分析法電化學(xué)分析法光譜分析法：比色法、紫外分光、熒光分光光法色譜分析法：HPLC法

7、：RP-HPLC、HPIEC、HPGFC、灌注色譜法、HPCE法酶法：酶活力測(cè)定法、酶分析法電泳法生物檢定法返回1．電化學(xué)分析法藥物膜電極生物組織膜電極藥物電極微生物電極離子選擇性電極法免疫電極免疫場(chǎng)效應(yīng)管酶電極第三節(jié)常用定量分析方法及其應(yīng)用2.HPLC法1）RP-HPLC：柱前衍生化自動(dòng)測(cè)定氨基酸柱：RP—18，柱溫：48℃流動(dòng)相：A--0.05%TFA；B--乙腈-異丙醇（4：1）梯度洗脫熒光檢測(cè)器：?ex=280nm～340nm,?em=430nm測(cè)定：樣品---肽樣品水解：5.7mol/L鹽酸，0.1%苯酚、通N2，110℃

8、，20h～24h。樣品干燥：真空樣品的衍生化：丹酰氯水解剩余的衍生化試劑：0.