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1、蒽酮法測定可溶性糖方法（一)實驗原理糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖類與蒽酮反應生成的有色物質在可見光區(qū)吸收峰為630nm，故在此波長下進行比色。（二）材料、儀器設備及設計1材料12種源砂生槐葉片，2種處理，4個重復，共96個樣。2儀器設備分光光度計，恒溫水浴鍋，20ml刻度試管，5ml和1ml刻度吸管，5ml和1ml的移液槍，記號筆，吸水紙適量。3試劑?（1）蒽酮
2、乙酸乙酯試劑：取分析純蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，貯于棕色瓶中，在黑暗中可保存數(shù)周，如有結晶析出，可微熱溶解。?（2）100ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖標準液：精確稱取蔗糖1.000g，加入少量水溶解，移入100ml容量瓶，加0.5ml濃硫酸，定容至刻度線。100ug/L蔗糖溶液的配制：用移液槍精確吸取1%蔗糖標準液1ml，加入到100ml容量瓶，加蒸餾水定容。（3）濃硫酸（比重1.84）?（三）實驗步驟1．標準曲線的制作：按表1加入標準的蔗糖溶液，然后按順序向試管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯試劑
3、和5ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管準確保溫1min取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在630nm波長下測其光密度，以光密度為縱坐標，以糖含量為橫坐標，繪制標準曲線，并求出標準線性方程。試劑管號01，23,45,67,89,10100μg.1-100.20.40.60.81蔗糖/ml水/ml21.81.61.41.21蔗糖量/μg0204060801002．取樣取不同種源砂生槐幼苗，用蒸餾水沖洗干凈，隨后用吸水紙吸干水分。將葉片切下，用錫箔紙包住，放入液氮中冷凍。取完后將樣品放入-
4、80℃冰箱中保存。3．可溶性糖的提取?將樣品從冰箱中取出，稱取0.20－0.30g，記錄重量，使用鑷子將樣品夾入刻度試管中，加入10mL?蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液過濾入25ml容量瓶中，反復沖洗試管及殘渣，定容至刻度。4．顯色測定吸取樣品提取液0.5ml于20ml刻度試管中（重復2次），加蒸餾水1.5ml，然后加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯試劑和5ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管準確保溫1min取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比（切勿忘掉對照）。在
5、630nm波長下測其光密度，測定樣品的光密度。?5．計算可溶性糖的含量，計算公式：??C?×?V總?×?D?樣品含糖量（%）=??─────────────?×?100%?????????????????????????W?×?V測?×?106?其中：C——在標準曲線上查出的糖含量（μg），?V總——提取液總體積（ml），?V測——測定時取用體積（ml），?D——稀釋倍數(shù)，?W——樣品重量（g），?106——樣品重量單位由g換算成μg的倍數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計表海拔處理編號吸光度標準曲線斜率標準方程求得糖含量C（
6、ug）提取液量V（ml）吸取樣品液體積a（ml）稀釋倍數(shù)組織重量（W）計算所得可溶性糖含量平均值2900CK111112113114PEG1211221231243000CK211212213214PEG2212222232243100CK311312313314PEG3213223233243258CK411412413414PEG4214224234243600CK511512513514PEG5215225235243600--1CK611612613614PEG6216226236243700
7、CK711712713714PEG7217227237243800CK811812813814PEG8218228238243900CK911912913914PEG9219229239244000CK1011101210131014PEG10211022102310244100CK1111111211131114PEG11211122112311244200CK1211121212131214PEG1221122212231224
