總糖的測(cè)定蒽酮比色方法.doc

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1、總糖測(cè)定——蒽酮比色法一、原理：?jiǎn)翁穷愑鰸饬蛩釙r(shí)，脫水生成糠醛衍生物，后者可與蒽酮縮合成藍(lán)綠色的化合物，當(dāng)含糖量在20～200mg/L范圍內(nèi)時(shí)，其呈色強(qiáng)度與溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。二、試劑：1、10～100ppm葡萄糖系列標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，從中吸取1、2、4、6、8、10ml分別移入100ml容量瓶中，用水定容，即得濃度為10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。2、0.1%蒽酮溶液：稱取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，貯存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。3、72%硫酸溶液。三、測(cè)定方法：（一）樣

2、品處理：稱取適量樣品，用100ml水轉(zhuǎn)移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸鋅和5ml亞鐵氰化鉀，沸水浴5～10min，定容，靜置至上清，過(guò)濾。根據(jù)估計(jì)含糖量，去濾液進(jìn)行稀釋，使糖含量在20～80mg/L范圍內(nèi)。（二）測(cè)定吸取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液（含糖20～80ppm）、蒸餾水（空白）各2ml，分別加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮試劑10ml，立即搖勻，放入沸水浴中準(zhǔn)確加熱10min，取出，迅速冷卻至室溫，在暗處放置10min，用1cm比色杯，以零管調(diào)儀器零點(diǎn)，在620nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品溶液的吸光度查標(biāo)準(zhǔn)曲線，得糖含量。四、結(jié)果計(jì)算：總糖（以葡萄糖計(jì)，%）=c

3、×稀釋倍數(shù)×10-4式中：c：從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的糖濃度，ppm（ug/ml）；10-4：將ppm換算為%的系數(shù)五、說(shuō)明與討論1、該法是微量法，適合于含微量碳水化合物的樣品，具有靈敏度高，試劑用量少等優(yōu)點(diǎn)。2、該法按操作的不同可分為幾種，主要差別于蒽酮試劑中硫酸的濃度（66～95%），取樣量（1～5ml）、蒽酮試劑用量（5～20ml）、沸水浴中反應(yīng)時(shí)間（6～15min）和顯色時(shí)間（10～30min）。這幾個(gè)操作條件之間是有聯(lián)系的，不能隨意改變其中任何一個(gè)，否則將影響分析結(jié)果。3、反應(yīng)液中硫酸的濃度高達(dá)60%以上，在此高酸度條件下，在沸水浴中加熱，可使雙糖、淀粉等發(fā)生水解，再與蒽酮發(fā)生顯色反應(yīng)。因

4、此測(cè)定結(jié)果是樣液中單糖、雙糖和淀粉的總量。如要求測(cè)定結(jié)果不包括淀粉，應(yīng)該用80%乙醇作提取劑，以避免淀粉和糊精溶出。此外，在測(cè)定條件下，纖維素也會(huì)與蒽酮試劑發(fā)生一定程度的反應(yīng)，因此應(yīng)避免樣液中含有纖維素。4、蒽酮試劑不穩(wěn)定,易被氧化變?yōu)楹稚?，一般?yīng)當(dāng)天配制，添加穩(wěn)定劑硫脲后，在冷暗處可保存48小時(shí)。5、此法要求樣液必須清澈透明，加熱后不應(yīng)有蛋白質(zhì)沉淀，如樣液色澤較深，可用活性炭脫色。