抗壞血酸誘導(dǎo)體外培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞

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1、抗壞血酸誘導(dǎo)體外培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞李捷，張宜明，劉穎，夏暉，于長海（解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院心胸外科，北京100037）提要：目的　探討采用抗壞血酸誘導(dǎo)體外培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞（mouseembryonicstemcell，ES）分化為心肌細(xì)胞的可行性。方法未分化ES細(xì)胞在滋養(yǎng)層上長至匯合，胰酶消化成單個(gè)細(xì)胞經(jīng)旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器制備擬胚體（embryoidbodies，EB），EB貼壁后用抗壞血酸誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞。通過光鏡觀察跳動的心肌細(xì)胞，采用免疫組織化學(xué)、激光共聚焦和RT-PCR的方法鑒定心肌細(xì)胞。結(jié)果抗壞血酸能有效地誘導(dǎo)小

2、鼠胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞的分化，誘導(dǎo)效率為90%；分化的心肌細(xì)胞自發(fā)而有節(jié)律地收縮，心肌肌鈣蛋白T(cTnT)、α-輔肌動蛋白(a-actinin)、肌動蛋白(actin)表達(dá)陽性。此外，分化的心肌細(xì)胞還表達(dá)調(diào)控心肌發(fā)育的基因a-MHC、?-MHC。結(jié)論　抗壞血酸能有效地誘導(dǎo)體外培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞。關(guān)鍵詞:小鼠胚胎干細(xì)胞；心肌細(xì)胞；抗壞血酸；細(xì)胞培養(yǎng)中圖法分類號：文獻(xiàn)標(biāo)識碼：AAscorbicacidinducesdifferentiationofmouseembryonicstemcellsintocardiacmyocyt

3、esLIJie，ZHANGYi-ming,LIUYing,XIAHui，YUChang-hai(DepartmentofCardio-thoracicSurgery,Thefirstaffiliatedhospital,PLAGeneralHospital,Beijing100037,China)Abstract:objectiveToevaluatedascorbicacidforitspotentialtoinducecardiacdifferentiationofmouseembryonicstemcells(mEScells).M

4、ethodsUndifferentiatedmouseembryonicstemcellsgrewconfluentandweredigestedbytypsintosinglecelltoformembryoidbodies(EBs)byrotarycellculturesystem(RCCS).Afterplated,EBswasinducedbyascorbicacid,alsoknownasvitaminC,intocardiomyocytes.Underlightmicroscope,cardiomyocytesdisplaye

5、dspontaneousandrhythmiccontractileactivityandwereidentifiedbyimmunohistochemistry、confocallaserscanningmicroscopy(CLSM)andRT-PCR.Results.Aftertreatmentwithascorbicacid,thenumbersofbeatingcellsweremarkedlyincreasedandtheratioofinductionwasupto90%.Cardiomyocyteswerestainedp

6、ositivelyforcTnT，a-actininandactinbyimmunohistochemistry，confocallaserscanningmicroscopy.Furthermore,cardiomyocytesinducedbyascorbicacidexpressedcardiacgenes,includinga-MHC、?-MHC.ConclusionAscorbicacidcouldinduceeffectivelycardiacdifferentiationfrommEScells.KeyWords：mouse

7、embryonicstemcells;cardiomyocyte;ascorbicacid;cellculture獲得足夠數(shù)量、不引起免疫排斥反應(yīng)且具有再生活力的心肌細(xì)胞是開展組織工程研究的前提和基礎(chǔ)。胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcell，ESC)是從早期哺乳動物囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)發(fā)育而來,在體外具有無限增殖能力和發(fā)育的全能性。胚胎干細(xì)胞作為心肌組織工程的種子細(xì)胞來源，除需要對擬胚體（embryoidbodies，EB）進(jìn)行規(guī)?；瘮U(kuò)增以獲得足夠數(shù)量ES細(xì)胞此外，還需要將獲取的ES細(xì)胞在一定條件下，定向誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞才有望用于心肌

8、組織的體外構(gòu)建研究。目前，EBs的制備方法有限，包括懸滴培作者簡介：李捷，男，山東省日照市人，醫(yī)學(xué)博士，主治醫(yī)師。主要從事心肺移植及肺部外科，發(fā)表論文9篇。電話：(010)66848361Em