《梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)》ppt課件

《梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)》ppt課件

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1、梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)檢驗(yàn)科李修敏梅毒的病原學(xué)蒼白螺旋體:細(xì)長(zhǎng)螺旋形,原核微生物,長(zhǎng)7-14微米,不易著色,普通顯微鏡不易看到,可用暗示野顯微鏡觀測(cè)到。人體的免疫學(xué)反應(yīng)非特異性抗心脂質(zhì)抗體可用牛心脂質(zhì)檢測(cè)出抗梅毒螺旋體抗體可用梅毒螺旋體檢出梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)非螺旋體抗原血清試驗(yàn)(抗原:心磷脂膽固醇卵磷脂)臨床意義:初篩療效評(píng)價(jià)復(fù)發(fā)及再感染的判斷螺旋體抗原血清試驗(yàn)(抗原:精選的梅毒螺旋體抗原片段)臨床意義:診斷試驗(yàn)是否感染過(guò)梅毒無(wú)法評(píng)價(jià)療效非螺旋體抗原血清試驗(yàn)鏡下判讀結(jié)果性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)VenerealDiseaseResearchLaboratory非加

2、熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(USR)UnheatedSerumReaging肉眼判讀結(jié)果快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)RapidPlasmaReaging甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)ToludineRedUnheatedSerumTest試驗(yàn)方法(TRUST)試劑復(fù)溫(23℃-29℃)試劑與血清等量混勻,水平轉(zhuǎn)動(dòng)8分鐘。結(jié)果判斷:中等或大的紅色凝聚物為陽(yáng)性反應(yīng);較小的紅色凝聚物為弱陽(yáng)性反應(yīng);無(wú)凝聚物為陰性反應(yīng)。存在的問(wèn)題◆假陽(yáng)性1、生物學(xué)假陽(yáng)性:見(jiàn)于瘤型麻風(fēng)、瘧疾、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、雅司病、回歸熱、鉤端螺旋體病、血吸蟲(chóng)病、包蟲(chóng)病、旋毛蟲(chóng)病、支原體肺炎、傳染性

3、單核細(xì)胞增多癥、結(jié)核病等疾2、人為因素:試劑與血清反應(yīng)后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),因干燥在紙片上留下假性凝集;沒(méi)有做陰性對(duì)照,肉眼判定錯(cuò)誤;標(biāo)本錯(cuò)誤?!艏訇幮苑磻?yīng)時(shí)間不足、反應(yīng)方式不正確、反應(yīng)溫度不夠、前帶現(xiàn)象。螺旋體抗原血清試驗(yàn)熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FTA-ABS)梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)梅毒螺旋體被動(dòng)微粒凝集試驗(yàn)(TPPA)ELISA法梅毒抗體檢測(cè)膠體金法梅毒抗體檢測(cè)ELISA法梅毒抗體檢測(cè)全自動(dòng)酶免儀、全自動(dòng)洗板機(jī)半自動(dòng)酶免儀、半自動(dòng)洗板機(jī)手工法操作步驟及原理同其它免疫項(xiàng)目注意的問(wèn)題實(shí)驗(yàn)器材的計(jì)量(酶免儀、洗板機(jī)、恒溫箱、冰箱、空調(diào)、生物安全柜、精確

4、移液器、量筒、振蕩器、溫度計(jì))環(huán)境溫度:室溫(18℃-23℃)人員培訓(xùn)樣本的要求實(shí)驗(yàn)前試劑的復(fù)溫精確的加樣:移液器的正確使用續(xù)移液器的使用吸液的操作: 1、連接恰當(dāng)?shù)奈欤?、按下控制鈕至第一檔;3、將移液器吸嘴垂直進(jìn)入液面下1-6mm(視移液器容量大小而定);0.1-10ul容量的移液器進(jìn)入液面下1-2mm 2-200ul容量的移液器進(jìn)入液面下2-3mm 1-5ml容量的移液器進(jìn)入液面下3-6mm注:為使測(cè)量準(zhǔn)確可將吸嘴預(yù)洗3次,即反復(fù)吸排液體3次。4、使控制鈕緩慢滑回原位;---?。。?、移液器移出液面前略等待1-3秒;1000ul以下停頓1秒5-10ml

5、停頓2-3秒. 6、緩慢取出吸嘴,確保吸嘴外壁無(wú)液體。續(xù)移液器的使用排液的操作: 1、將吸嘴以一定角度抵住容量?jī)?nèi)壁;2、緩慢將控制鈕按至第一檔并等待約1-3秒;3、將控制鈕按至第二檔過(guò)程中,吸嘴將剩余液體排凈;4、慢放控制鈕;5、按壓彈射鍵彈射出吸嘴。續(xù)移液器的使用養(yǎng)護(hù):1、如液體不小心進(jìn)入活塞室應(yīng)及時(shí)清除污染物;2、移液器使用完畢后,把移液器量程調(diào)至最大值,且將移液器垂直放置在移液器架上;3、根據(jù)使用頻率所有的移液器應(yīng)定期用肥皂水清洗或用60%的異丙醇消毒,再用雙 蒸水清洗并晾干;4、避免放在溫度較高處以防變形致漏液或不準(zhǔn);5、發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)找專業(yè)人員處理。注

6、意的問(wèn)題加樣:加酶標(biāo)液:加底物:加終止液:震蕩:蓋膜:洗板:洗滌液的要求握板的要求注意的問(wèn)題比色:孵育時(shí)間:操作時(shí)差的問(wèn)題:質(zhì)控問(wèn)題:內(nèi)部質(zhì)控、外部質(zhì)控影響ELISA測(cè)定結(jié)果的干擾因素外源性干擾因素:溶血、細(xì)菌污染、標(biāo)本保存不當(dāng)、標(biāo)本凝集不全、添加劑內(nèi)源性干擾因素:RF、補(bǔ)體、嗜異性抗體等結(jié)果解釋圖標(biāo)演示三種梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果解釋試驗(yàn)結(jié)果意義RPR+FTA-ABS+TPPA+梅毒RPR+FTA-ABS-TPPA-生物學(xué)假陽(yáng)性RPR-FTA-ABS+TPPA-極早期梅毒RPR-FTA-ABS+TPPA+治愈梅毒RPR-FTA-ABS-TPPA-排除梅毒、AID

7、S合倂感染先天性梅毒的確證指標(biāo)暗示野查到梅毒螺旋體患兒RPR滴度持續(xù)上升(出生后6個(gè)月內(nèi)每隔1個(gè)月查1次滴度)RPR滴度高于其母親患兒檢出抗梅毒19s-IgM具備以上指標(biāo)之一即可診斷神經(jīng)梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷腦脊液VDRL+(不是RPR)血清特異性螺旋體抗體+謝謝大家

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