資源描述:
《高效液相色譜使用與維護》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、高效液相色譜的使用與維護浙江省疾病預防控制中心蔡增軒液相色譜儀器部件日常維護色譜圖相關術語實驗操作與應用一些商品化儀器agilentdionexHPLC的環(huán)境設置:良好的接地專門房間定制臺面不間斷電源HPLC的日常操作條件:溫度:10~30℃,最好是恒溫;空調(diào)器相對濕度<80%,最好是恒濕;除濕機遠離高電磁干擾、高振動設備;有良好的通風設施;通風罩高效液相色譜儀組成輸液系統(tǒng)進樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)溶劑色譜泵自動進樣器HPLC色譜柱檢測器廢液數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)液相色譜流程圖HPLC色譜泵自動進
2、樣器色譜柱及柱溫箱檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)溶劑液相色譜的流動相1.流動相特性(1)流動相(淋洗液,洗脫劑):組成改變,極性改變,可顯著改變組分分離狀況;(2)親水性固定液常采用疏水性流動相,即流動相的極性小于固定相的極性,稱為正相液液色譜法,極性柱也稱正相柱。(3)若流動相的極性大于固定液的極性,則稱為反相液液色譜,非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。2.流動相類別按流動相組成分:單組分和多組分按極性分:極性、弱極性、非極性按使用方式分:等度洗脫和梯度洗脫常用溶劑己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙
3、酯、乙醇、乙腈、水。3.流動相選擇在選擇溶劑時,溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。正相液-液分配分離:先選中等極性溶劑,若組分的保留時間太短,降低溶劑極性,反之增加。也可在低極性溶劑中,逐漸增加其中的極性溶劑,使保留時間縮短。常用溶劑的極性順序:水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)高效液相色譜流動相溶劑的物化性質(部分)合適選擇性溶劑液相色譜溶劑選擇范圍液相色譜流動相溶
4、劑的選擇步驟:●選擇具有合適物理性質的溶劑,如沸點、粘度、紫外截止波長等●選擇合適洗脫強度的溶劑:簡單樣品,2≤k’≤5;復雜樣品,0.5≤k’≤20●改變?nèi)軇┑倪x擇性,使被分離組分具有較高的α值所有溶劑合適物理性質溶劑合適保留值溶劑液相色譜中的溶劑強度1.溶劑強度是描述色譜性能的主要指標,表示溶劑對樣品的洗脫能力,它決定于溶劑與溶質之間分子的作用力。目前還沒有一個統(tǒng)一標準描述不同類型液相色譜體系中的溶劑強度,而是采用相對極性和溶解度參數(shù)等作為溶劑強度指標。1)溶解度參數(shù)?(參見溶劑選擇性)2)極性參數(shù)P’根
5、據(jù)固定相和流動相的極性大小,人們把液相色譜分成:◆正相色譜:固定相極性大于流動相(包括硅膠吸附色譜)◆反相色譜:固定相極性小于流動相正相色譜:增加溶劑極性,保留時間增大或變???反相色譜:增加溶劑極性,保留時間又如何變化?洗脫強度與溶劑極性分子之間相互作用有色散力、偶極作用、氫鍵和介電作用。某一溶質與其它分子相互作用大小的程度可以用極性大小表示。極性越大,它與其它分子的作用力越大?!皹O性”溶劑容易吸收和溶解“極性”物質。溶劑洗脫強度指流動相中溶劑的洗脫能力,它不僅與流動相,而且與固定相的極性有關。在正相色譜中,
6、“溶劑洗脫強度”與溶劑極性成正比;而在反相色譜中,溶劑極性越大,洗脫能力越小。溶劑強度圖反相色譜THF/H2OACN/H2OMeOH/H2O020406080100正相色譜020406080100甲醇戊烷異丙基氯二氯甲烷乙醚乙腈00.150.30.450.60.75??混合溶劑的極性在液相色譜中,一般溶劑的極性變化二個單位,溶質的分配比差不多能有十倍的變化。通過溶劑強度參數(shù)的計算,可以較好地較快地選擇合適溶劑或調(diào)整流動相的極性范圍。如:①正相色譜:k2’/k1’=exp[(P1’-P2’)/2]②反相色譜:k
7、2’/k1’=exp[(P2’-P1’)/2]在液相色譜常用混合溶劑作流動相?;旌先軇┑腜’具有加和性:P’ab=?aP’a+?bP’b,?為某一溶劑的體積分數(shù)。溶劑選擇性分類一般地說,改變?nèi)軇┍壤烧{(diào)節(jié)流動相的極性,從而使得組分的容量因子落在合適的范圍內(nèi)。但由于分子間相互作用的類型相同,分離因子變化不大。因此專門研究了各種溶劑的選擇性,并將常用溶劑進行分類。質子給予體偶極相互作用質子接受體溶劑選擇性分類三角形圖XeXdXn12345678純質子接受體強偶極中性化合物純質子給予體1組:脂肪醚(純質子接受體)2
8、組:脂肪醇(質子接受-給予體)3組:吡啶衍生物、四氫呋喃(質子接受體,易極化)4組:乙二醇、芐醇、乙酸、甲酰胺(質子給予體)5組:二氯甲烷、二氯乙烷(大偶極距)6組:脂肪酮、酯、二氧六環(huán)、腈7組:芳烴、芳醚、硝基甲烷8組:氟代醇、氯仿、水(質子給予體)質子給予體偶極相互作用質子接受體反相色譜中的溶劑選擇性1甲醇2TFH345乙腈67水8質子給予體偶極相互作用質子接受體正相色譜中的溶劑選擇性醚1234