艾滋病抗體檢測技術(shù)

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1、HIV抗體篩查方法疾病預(yù)防控制中心2009年HIV的感染機(jī)制簡述HIV在病毒分類中屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬中的人類免疫缺陷病毒組。迄今為止，根據(jù)血清學(xué)反應(yīng)和病毒核酸序列測定，全球流行的HIV可分為2型：HIV-1型和HIV-2型。在HIV-1型內(nèi)，根據(jù)編碼包膜蛋白的env基因和編碼殼蛋白的gag基因序列的同源性又進(jìn)一步分為3個組：Ｍ組（主要組）、Ｏ組（外圍組）和Ｎ組（新組或非M非O組），Ｍ組內(nèi)又可分為Ａ-Ｊ10個亞型。在HIV-1型和HIV-2型之間,其核苷酸序列有45％-50%的同源性，并且存在免疫交叉反應(yīng)。應(yīng)用免疫印跡法(Westblot)可以將二者明確地區(qū)別開來。HIV的感染機(jī)制簡述

2、HIV-1和HIV-2型雖然都起源于非洲，但HIV不同型，不同組甚至不同亞型在全球流行是不均一的。HIV-1的O組，N組和HIV-2型只局限在非洲某些局部地區(qū)流行。而HIV-1的M組病毒呈全球性流行。到目前為止，全球流行的絕大多數(shù)毒株是HIV-1M組中的A、C亞型毒株，接著是B亞型毒株，然后是A/E和A/G亞型重組毒株。進(jìn)一步的分子流行病調(diào)查表明，在非洲幾乎流行了HIV的所有亞型，但以A和C亞型為主，同時，也正由于眾多亞型的共流行，那里也是發(fā)生病毒重組最多的地方。在北美、歐洲和澳大利亞，B亞型仍然是最常見的亞型，雖然M組的其它幾個亞型、甚至O組病毒已經(jīng)在美國和歐洲幾個國家有報道，但進(jìn)一步

3、的現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查證實，這些人中的大多數(shù)是來自非洲的移民。在南美，B亞型占有優(yōu)勢，但C、F亞型也有流行。在阿根廷和巴西有B/F重組毒株的報道。在亞洲，好幾種不同的HIV-1亞型流行于不同區(qū)域，在印度C亞型占主導(dǎo)，同時有A、B亞型共流行和A/C亞型重組毒株的報道。在泰國則有二種獨立的亞型流行，B亞型和E亞型（即A/E亞型重組毒株）。在我國主要以B、C和E亞型流行，但同時也A、F和HIV-2型的報道。HIV的感染機(jī)制簡述HIV病毒侵入人體后，其表面糖蛋白gp120與細(xì)胞表面受體蛋白CD4以高親和力結(jié)合，吸附到宿主細(xì)胞上；gp120再與宿主細(xì)胞表面輔助受體相互作用，使病毒與宿主細(xì)胞膜更接近；g

4、p41產(chǎn)生一系列構(gòu)象變化，其N端的融合肽片段插入宿主細(xì)胞膜，導(dǎo)致病毒包膜與細(xì)胞膜的最終融合，病毒RNA進(jìn)入細(xì)胞。在HIV感染后，最先能夠監(jiān)測到病毒RNA、然后是p24抗原，最后是抗體。HIV的感染機(jī)制簡述在感染后的10～14d內(nèi)，病毒RNA水平是呈指數(shù)上升，隨后下降并保持在持續(xù)穩(wěn)定的水平上，進(jìn)入HIV無癥狀期p24抗原水平隨著病毒RNA水平的發(fā)展而發(fā)展，在急性感染期就可以出現(xiàn)，被認(rèn)為是病毒復(fù)制的間接標(biāo)志，但由于檢測方法的靈敏度不夠而使得其檢出時間要比RNA晚。HIV的感染機(jī)制簡述窗口期概念：從HIV感染到能夠檢測出HIV抗體這一時期,被稱作“窗口期”。在窗口期，只有通過病毒RNA、p24

5、抗原和CD4淋巴細(xì)胞水平來確定HIV感染。CD4淋巴細(xì)胞水平隨著感染的發(fā)展而逐漸下降,當(dāng)其在血液中細(xì)胞下降到200個/mm3時，就會發(fā)生嚴(yán)重的免疫缺陷，患者就被確診為艾滋病。病毒RNA、p24抗原、HIV抗體和CD4淋巴細(xì)胞水平可以用來確定HIV感染、檢測病情發(fā)展。HIV感染的主要檢測方法目前檢測HIV的方法有100多種，總體來說可以分為抗體檢測和病毒檢測兩大類。早期對HIV的診斷主要是通過血清學(xué)試驗檢測抗HIV的抗體,間接地診斷HIV感染。病毒檢測包括p24抗原檢測、細(xì)胞培養(yǎng)(病毒分離)和病毒核酸檢測?？乖軌蛟趥€體感染后先于血清轉(zhuǎn)化2～18d被檢測到。因此，在血清轉(zhuǎn)化期通過檢測p24

6、抗原有著很大的優(yōu)勢，可以作為早期輔助診斷HIV感染的一種方法。HIV感染的主要檢測方法病毒培養(yǎng)是檢測HIV感染最精確的方法。一般采取培養(yǎng)外周血單個核細(xì)胞(PBMC)的方法進(jìn)行HIV的診斷。在窗口期可以檢測到病毒相關(guān)抗原或分離病毒。病毒核酸檢測通常是通過檢測HIVRNA水平來反映病毒載量，具有很高的靈敏度，使用適時熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)，能夠在HIV感染的前2周檢測到病毒核酸。病毒核酸檢測方法可用于HIV的早期診斷，如窗口期輔助診斷、病程監(jiān)控、指導(dǎo)治療方案及療效測定、預(yù)測疾病進(jìn)程等。目前常用的測定方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR實驗(RTPCR)、核酸序列擴(kuò)增實驗(NASBA)、分支DNA雜交實

7、驗(bDNA)等。近幾年，分子生物學(xué)方法不斷被應(yīng)用到HIV的檢測中，HIV的實驗室診斷方法取得了很大的進(jìn)展，核酸檢測已經(jīng)成為了HIV實驗室診斷的發(fā)展方向。HIV感染的主要檢測方法抗體通常是在感染后3～8周能夠被檢測出來，在窗口期，病毒抗體不能被檢出?？贵w檢測由初篩和確認(rèn)試驗組成，目前，大多應(yīng)用雙抗原夾心法進(jìn)行抗體篩查，這種方法具有很好的靈敏性和特異性。酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)方法有一定的靈敏度，且操作簡單、快速，適合對大量樣品