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1、石蠟包埋技術(shù)制作石蠟切片,切片前須將石蠟滲透組織包埋于石蠟中,而水與石蠟又是不相混合的,所以在浸蠟,包埋前必須將組織內(nèi)所含的水分脫去。而大多數(shù)的組織固定劑是水溶液,隨后的水沖洗也使其含有大量水分,因此必須先行脫水,一般是浸入逐級增加濃度的酒精來完成。由于酒精和石蠟不能混合,須再用一種石蠟的溶劑來置換酒精,因大多數(shù)石蠟溶劑有使組織的折光率增高并表現(xiàn)為透明或半透明狀,所以此步驟又稱透明。最后用石蠟浸漬組織并鑄制成堅實的蠟塊。常規(guī)的石蠟包埋過程包括五個基本步驟,即固定,脫水,透明,浸蠟和包埋,前一章中已述過固定。第一節(jié)脫水脫水就是用脫水劑完全除去組織內(nèi)的水分,為下一步透明
2、及浸蠟創(chuàng)造條件。此外,脫水還可以使組織再次發(fā)生一定的硬化,脫水劑必須是與水在任何比例下均能混合的液體。一.常用的脫水劑1.酒精:是制片最常用的試劑,可與水在任何比例下相混合,酒精的脫水能力比較強,又能硬化組織。但是酒精的船頭速度很快,對于組織會有明顯的收縮作用。因此在以酒精作為脫水劑時,應(yīng)該先從濃度較低的酒精開始,然后遞增其濃度,這樣可以避免組織過度收縮。第一瓶酒精濃度隨固定劑,脫水組織的大小和種類而異,經(jīng)水溶性固定劑固定的細柔組織需要慢慢脫水,從50%酒精開始。如眼球,組胚組織等大多數(shù)組織標本則是從70%酒精開始,再經(jīng)80%,95%以至無水酒精。但是有時為了某種特
3、殊要求,例如要做糖元的切片標本或是要做尿酸結(jié)晶染色切片標本,為了防止糖元和尿酸結(jié)晶在水中消失卻要直接投入無水酒精中固定,而不需要經(jīng)過水洗和低濃度酒精的脫水過程。經(jīng)無水酒精固定后的組織只需要再經(jīng)過換一次無水酒精脫水即可。10用AAF固定液固定的組織可直接置于95%酒精開始脫水。用醇性固定劑(如Carnoy)則可置于高濃度無水酒精內(nèi),但應(yīng)多次換液以除酸。一般情況下,組織經(jīng)過70%,80%,90%,95%,以至無水酒精的脫水程序,即可達到脫水的要求。但是為了能使大量的組織塊同時進行脫水,則要求保持液體的濃度以保證脫水的作用,最好是以兩次95%酒精,兩次100%酒精重復(fù)進行
4、脫水,以保證組織的水分脫凈。脫水時間應(yīng)視組織種類,組織塊大小,厚薄和固定劑的不同而異。如脫鈣的骨組織,實質(zhì)性臟器等的脫水過程宜短,而疏松結(jié)締組織,脂肪組織等,脫水過程則宜適當(dāng)延長。水分必須脫干凈,脂肪必須溶去。含有鉻酸的固定劑固定的組織,脫水時間不宜過長,而鍍銀組織更應(yīng)注意,脫水時間應(yīng)比為鍍銀的同類組織要短。脫水的基本原則:從低濃度酒精開始逐漸升到高濃度酒精,以保持組織中的水分完全脫凈。一般1cmX1cmX0.2cm大小的組織,脫水全過程僅需要數(shù)小時即可達到完全脫水。在各級濃度酒精內(nèi)處理的最短時間分別減少到2—4小時也能獲得滿意的結(jié)果。如果組織脫水不盡,隨后的透明,
5、浸蠟都會受到影響,致使切片很難以完成。較差質(zhì)量的切片,很容易造成在染色時脫片,這樣的組織蠟塊,因其含有一定的水分,一經(jīng)與空氣接觸即干燥而凹陷。脫水不盡的組織是不能切出很好的切片的。外檢標本的制作,目前都采用快速脫水的方法??蒲袠吮?教學(xué)標本的脫水時間比較長,其目的在于更充分脫水,并適當(dāng)加強了組織的硬度。酒精脫水劑使用不宜太久,應(yīng)適時更換新液。當(dāng)酒精混濁,變黃或酒精滴于水中出現(xiàn)乳白色混濁時,說明酒精中溶解了過量的脂類,這種情況一出現(xiàn),將會影響脫水,則應(yīng)及時更換。各種濃度酒精的配制:切片室內(nèi)應(yīng)常備有70%,80%,85%等各種濃度的酒精。配制時應(yīng)以95%酒精作為基液加水
6、稀釋,不要用無水酒精去配制,因無水酒精的價格較高,極不經(jīng)濟。10配制方法如下:a.先將高濃度酒精注入量杯,其量同將要稀釋酒精濃度數(shù)字相等。b.加入蒸餾水,致總量達到原酒精濃度的數(shù)字量。例如:用95%酒精配制成70%酒精時:(1)取95%酒精70毫升;(2)加蒸餾水使達到95毫升;稀釋后的酒精既為70%的酒精。用80%酒精配制成60%酒精時:(1)取80%酒精60毫升;(2)加蒸餾水使達到80毫升;稀釋后的酒精既為濃度為60%的酒精.其余類推,其他的試劑的稀釋也均可以參照此方法進行配制。2.丙酮(Acetone):可用作固定液,也是一種比較好的脫水劑。脫水能力強、速度
7、快,可配制不同濃度進行脫水。但一般情況下,多用在無水酒精的補充脫水。丙酮脫水時間比酒精強,但容易使組織過度硬化,所以應(yīng)適當(dāng)掌握脫水時間。3.正丁醇(γ-Butyalcohol):正丁醇脫水能力較酒精弱,可與水、酒精相混合,而且也能溶解石蠟,因此正丁醇不僅可以替代酒精使組織脫水,還可以代替二甲苯使組織透明。平常在稀釋時都與酒精按照一定比例配制使用,或?qū)⒔M織脫水至90%酒精后移入正丁醇,正丁醇再脫水后可直接投入石蠟。用正丁醇脫水,組織比較少引起收縮和硬化等不良結(jié)果。104.二氧乙環(huán)(Dioxan):二氧乙環(huán)是一種有毒物質(zhì),易揮發(fā)(使用場所必須通風(fēng)),能同水、酒精、二