石蠟包埋(論壇)

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1、光學顯微標本的制作技術【實驗目的】了解光學顯微鏡切片制作技術的基本方法步驟?！緦嶒炘怼坎捎霉鈱W顯微鏡研究一般生物體的內部結構，在自然狀態(tài)下是無法觀察清楚的，多數(shù)動、植物材料都必須經(jīng)過某種處理，將組織分離成單個細胞或薄片，光線才能通過細胞。為了適應這個需要，就產生了光學顯微鏡制片技術。光學顯微鏡的制片技術方法可分為兩大類：一類是非切片法，另一類是切片法。非切片法，是用物理或化學的方法，使細胞彼此分離，如有分離法、涂布法、壓碎法等。非切片法的操作比較簡單，能保侍細胞的完整，但是細胞之間的正常位置往往被更動，無法反映細胞之間的正常聯(lián)系。它可以與切片法配合使用，

2、各取其長處。切片法，是利用銳利的刃具將組織切成極薄的片層，材料須經(jīng)過一系列特殊的處理，如固定、脫水、包埋、切片、染色等，過程十分繁復。在制作過程中，還要經(jīng)過一系列的物理和化學的處理，這些處理方法可根據(jù)各種不同材料的性質要求進行合理選擇。切片法雖然工序繁瑣，技術復雜，但是，它最能保持細胞間的正常的相互關系，能較好和較長時間地保留細胞的原貌，所以仍然是光學顯微鏡的主要制片方法。【實驗儀器、材料和試劑】（一）儀器：石蠟切片機、恒溫蠟箱、載玻片、蓋玻片（二）材料：洋蔥根或小鼠肝（三）試劑：乙醚、無水乙醇、甲醛、冰醋酸、苦味酸、重鉻酸鉀、鋨酸、正丁醇、二甲苯、石蠟、

3、甘油、雞蛋、紗布、加拿大樹膠、麝香草酚【方法與步驟】光學顯微鏡切片制作技術最簡單的切片法是徒手切片，但是由于組織塊往往十分柔軟，18切削很困難，而且無法得到十分菲薄的切片，因此必須先用某些特殊物質滲入組織塊的內部起支持作用，并將整個組織塊包住，然后再用精密的切片機制作切片，才能獲得良好的效果。這種方法稱為包埋法，包埋的物質稱為包埋劑。常用的包埋劑有石蠟、火棉膠、炭蠟、明膠等，水和塑料也可作為包埋劑。根據(jù)包埋劑的不同，分別有石蠟切片、火棉膠切片、冰凍切片等，它們各有長處，可以根據(jù)需要選用，但是使用得最多的還是石蠟切片技術。石蠟作為包埋劑，有其獨特的優(yōu)點，例如

4、：石蠟能切出極薄的蠟片（2～10μm）；切片時能連成蠟帶，便于制作連續(xù)切片；操作較容易，組織塊可以包埋在石蠟中長期保存。然而石蠟切片的制作過程較長，步驟很多，一步不慎往往導致前功盡棄，而且這些處理引起組織塊或多或少地收縮，切片時受濕度影響比較大，這些不足之處必須在制片過程中認真對待，盡量減小它的不良影響。石蠟切片的制作過程主要包括：取材，固定，脫水，透明，透蠟，包埋，切片，貼片，染色，透明，封藏等步驟。1．取材材料的好壞直接影響到切片的質量，無論取哪一種動植物材料，以下幾點是必須注意的。（1）植物材料選擇時須盡可能不損傷植物體或所需要的部分；動物材料取用時

5、常對動物施以麻醉，常用的麻醉劑有氯仿和乙醚，或將動物殺死后迅速取出所需要的組織。（2）取材必須新鮮，這一點對于從事細胞生物學研究尤為重要，應該盡可能割取生活著的組織塊，并隨即投入固定液。（3）切取材料時刀要銳利，避免因擠壓細胞使其受到損傷。（4）切取的材料應該小而薄，便于固定劑迅速滲入內部。一般厚度不超過2mm，大小不超過5×5mm2。2．固定組織和細胞離開機體后，在一定時間內仍然延續(xù)著生命活動，會引起病理變化直至歸于死亡。為了使標本能反映它生前的正常狀態(tài)，必須盡早地用某些化學藥品迅速地殺死組織和細胞，阻抑上述變化，并將結構成分轉化為不溶性物質，防止某些結

6、構的溶化和消失。這種處理就是固定。除了上述作用外，固定劑會使組織適當硬化以便于隨后的處理，還會改變細胞內部的折射系數(shù)并使某些部分易于染色。固定劑的作用對象主要是蛋白質，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作時不加考慮，如要觀察這些物質，可用特殊的方法將其固定下來。固定劑的作用表現(xiàn)在對材料體積的改變、硬化的程度、穿透的速度以及對染色的影響等方面。這些作用的好壞、大小，都依所固定的材料性質而定，同樣一種固定液對某一材料來說是良好的，但對另外一些組織可能就不很適用。良好的固定劑必須具備的特征是：穿透組織的速度快。，能將細胞中的內含物凝固成不溶解物質，不使組織膨脹或收

7、縮以保持原形，硬化組織的程度適中，增加細胞內含物的折光度，增加媒染和染色能力，具有保存劑作用。固定劑有簡單固定劑和混合固定劑的劃分。簡單固定劑即單一的固定劑，常用的有乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞、苦味酸、鉻酸、重鉻酸鉀和鋨酸。其中，苦味酸、升汞、鉻酸既能凝固細胞清蛋白，又能凝固核蛋白；乙醇只能凝固清蛋白，而醋酸只能凝固核蛋白；甲醛、餓酸和重鉻酸鉀對這兩種蛋白質都不凝固。簡單固定劑的局限性較大，如將其適當混合，制成復合固定劑可以取得更好的效果。常用的混合固定劑有：Bouin液（70份苦味酸飽和水溶液+25份4％甲醛+5份冰醋酸）、Zenker液（升汞5g＋重鉻酸

8、鉀2.5g＋硫酸鈉1.0g＋5ml冰醋酸＋100ml蒸鎦水）、Ca