石蠟包埋切片方法

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1、石蠟包埋組織樣品制備方法組織采集后，經(jīng)固定、保存、石蠟包埋、切片、展片、烤片，方可進(jìn)行HE染色（或其它化學(xué)染料染色）及免疫抗體標(biāo)記。以下操作依據(jù)組織大小及致密程度而定1、組織的采集、固定和保存：可依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康募敖M織的特點(diǎn)而考慮采用不同的固定和保存方法。此處只介紹實(shí)驗(yàn)室常用方法。采取組織后，4%多聚甲醛（4%PFA）4°C固定1小時(shí)（根據(jù)組織大小和致密程度調(diào)整固定時(shí)間）或過(guò)夜，PBS緩沖液洗三次，每次10min至1小時(shí)，于30%、50%乙醇中各10min至1小時(shí)，4°C保存于70%乙醇中。2、組織的包埋、切片、展片及保存：

2、：固定后的樣品經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明，52-54°C石蠟包埋，常規(guī)切片，切片厚4-10mm，貼于處理過(guò)的干凈載玻片上，34°C烤片過(guò)夜，之后收集于載片盒中，4°C密封保存。石蠟包埋：保存于4°C70%乙醇中的組織樣品ˉ80%乙醇15minˉ95%乙醇15minˉ100%乙醇15min′2ˉ1/2乙醇1/2二甲苯15minˉ二甲苯透明5-10minˉ1/2二甲苯1/2石蠟30minˉ石蠟（1）1.5hrˉ石蠟（2）1.5-2.5hrˉ石蠟（3）包埋ˉ4°C保存3、石蠟組織切片的免疫標(biāo)記：切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇復(fù)水，

3、即可進(jìn)行免疫反應(yīng)，操作步驟與冰凍組織切片的反應(yīng)方法相同。石蠟組織切片脫蠟、復(fù)水步驟：密封保存于4°C的組織切片ˉ二甲苯(1)10minˉ二甲苯(2)10minˉ二甲苯(3)10minˉ1/2二甲苯1/2乙醇15minˉ100%乙醇5minˉ95%乙醇5minˉ80%乙醇5minˉ70%乙醇5minˉ50%乙醇5minˉ30%乙醇5minˉd2H2O5min4、石蠟組織切片的HE染色：切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇復(fù)水，于蘇木精中室溫染色5-20min，迅速用水沖洗切片，至組織切片變藍(lán)，鏡檢。用0.1-0.5%鹽酸乙醇分色1～

4、2秒鐘，也可用50mlH2O中加一滴氨水分色，效果亦好（如染色程度恰好，也可省略分色步驟）。之后用流水沖洗切片，直至切片變藍(lán)，此稱藍(lán)化。切片經(jīng)梯度乙醇至95%乙醇中，于0.5%伊紅中染色1～5秒或更長(zhǎng)時(shí)間，95%乙醇洗去殘色，若顏色太深，可在低濃度的乙醇中脫色，鏡檢。無(wú)水乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片。普通光鏡觀察，室溫干燥條件下保存染色切片。石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇復(fù)水ˉ蘇木精室溫5-10minˉH2O迅速?zèng)_洗ˉ0.1%鹽酸乙醇1-2secˉ流水滴洗ˉ30%乙醇1minˉ50%乙醇1minˉ70%乙醇1min

5、ˉ80%乙醇1minˉ95%乙醇1minˉ伊紅A液1minˉ伊紅B液1-30secˉ無(wú)水乙醇1minˉ無(wú)水乙醇5min′2ˉ1/2乙醇1/2二甲苯15minˉ二甲苯(1)5minˉ二甲苯(2)5minˉ二甲苯(3)5minˉ中性樹膠封片，室溫干燥保存