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《熒光定量PCR檢測(cè)HBV—DNA與乙肝五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性探討》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、熒光定量PCR檢測(cè)HBV—DNA與乙肝五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性探討樸學(xué)哲任冬娟孫超（黑龍江省森工總醫(yī)院檢驗(yàn)科150040）【屮圖分類(lèi)號(hào)1R446【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A【文章編號(hào)11672-5085（2010）27-0392-01乙型肝炎是世界上最常見(jiàn)的傳染病之一，世界衛(wèi)生組織（WHO）估計(jì)，本病每年造成100萬(wàn)人死亡，慢性乙型肝炎是HBV感染的一種嚴(yán)重后果。HBV?DNA是直接反映乙肝病毒存在，活動(dòng)性復(fù)制及具有傳染性的可靠指標(biāo)。但目前我國(guó)現(xiàn)狀HBV感染者多以其血清感染標(biāo)志物（乙肝五項(xiàng)，HBV-M）判定，由于其組合模式復(fù)雜多樣，從而導(dǎo)致了臨床上對(duì)部分發(fā)病患者的
2、HBV感染復(fù)制狀況難以判斷，有時(shí)甚至?xí)霈F(xiàn)漏診的情況。定量PCR法的應(yīng)用，使得我們進(jìn)行HBV-DNA的檢測(cè)的同時(shí)得以對(duì)其進(jìn)行相對(duì)的量化，這對(duì)于乙肝患者體內(nèi)的HBV的復(fù)制以及傳染性有更直接的了解，同時(shí)也更有利于對(duì)臨床HBV感染的診斷、治療方案的選擇及療效的判斷。本文采用熒光定量RCR（FQ-PCR）對(duì)307例疑假裝乙肝患者標(biāo)本血清的不同HBV血清學(xué)標(biāo)志物組合進(jìn)行了HBV-DNA檢測(cè)，閉幕式對(duì)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以探討HBV?M與HBV-DNA復(fù)制水平的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下：1資料與方法1.1標(biāo)本來(lái)源均系2007年7月至2009年8月到我院就診的所有同時(shí)
3、做過(guò)乙肝五項(xiàng)及HBV-DNA檢測(cè)的疑似乙肝的門(mén)診和住院患者,共307例,其中女129人,男178人，年齡17?78歲，平均39歲。1.2檢測(cè)儀器1.2.1LightCycler定量擴(kuò)增儀（德國(guó)）。1.2.2Alisei全自動(dòng)酶標(biāo)儀（德國(guó)）。1.3檢測(cè)方法和試劑1.3.1HBV-M檢測(cè)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)檢測(cè)，試劑由上海科華生物技術(shù)有限公司,并嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。1.3.2HBV-DNA定量分析采用熒光定量PCR(FQ-PCR)法檢測(cè)，試劑由上海復(fù)星醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司提供，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)的步驟進(jìn)行操作。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理根據(jù)HBV血清標(biāo)志物
4、分為8組，將各組的HBV?DNA拷貝數(shù)進(jìn)行對(duì)數(shù)變換，以指數(shù)表示(±S),定量測(cè)量范圍仍用實(shí)際檢測(cè)值表示；采用X2檢驗(yàn)進(jìn)行組間HBV?DNA陽(yáng)性率顯著性檢驗(yàn)，采用兩樣本均數(shù)的t檢驗(yàn)比較拷貝數(shù)。2結(jié)果HBV-DNA定量測(cè)定結(jié)果307例疑似乙肝患者者血清標(biāo)本中，106例HBV-DNA陽(yáng)性,201例陰性，陽(yáng)性最低拷貝數(shù)為1.30E+03copy/ml,最高拷貝數(shù)為7.70E+09copy/mL注：*與大三陽(yáng)組比較P<0.01,#與大三陽(yáng)比較P<0.053討論P(yáng)Q-PCR是進(jìn)行臨床基因診斷的有效手段，它采用了完全閉管檢測(cè)，不需要PC
5、R后處理，避免了交叉感染；同吋采用實(shí)吋檢測(cè)技術(shù)，所得Ct值和原始模板數(shù)量完全呈線形相關(guān)，定量準(zhǔn)確率極高，它不僅具有普通PCR的高靈敏性，而且由于熒光探針的應(yīng)用，可以通過(guò)光電傳導(dǎo)系統(tǒng)PCR擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化以獲得定量結(jié)果，所以還具有DNA雜交的高特異性和光譜的高清確性，克服了常規(guī)PCR的許多缺點(diǎn)。ELISA法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)是臨床HBV感染的傳統(tǒng)手段，它檢測(cè)的是人體對(duì)HBV的免疫反應(yīng)狀態(tài)，而FQ?PCR則可以準(zhǔn)確的反應(yīng)出HBV-DNA復(fù)制水平、病程變化和治療恢復(fù)情況等。本文結(jié)果顯示，54例大三陽(yáng)組中，其HBV-DNA陽(yáng)性53例，檢出率達(dá)98.15%
6、,而且呈較高的拷貝量，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理大三陽(yáng)組和HBsAg(+)HBcAb(+)組與小三陽(yáng)組有顯著性差異，說(shuō)明這些患者HBV具有較高的復(fù)制水平，是具有傳染性的重要標(biāo)志。54例小三陽(yáng)血清中15例檢出HBV-DNA陽(yáng)性，檢出率為27.78%,平均拷貝數(shù)達(dá)到3.79E+05拷貝數(shù)和陽(yáng)性率均低于人三陽(yáng)組，但仍然具有較強(qiáng)的傳染性，說(shuō)明HBeAb的存在并不表示患者體內(nèi)沒(méi)有病毒復(fù)制，與既往文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果吻合。在34例HBsAg(+)HBcAb(+)血清中，有31例檢出HBV-DNA最性，檢出率為91.18%,平均拷貝數(shù)為2.85E+05/ml,提示該組中的病人仍具有羅
7、強(qiáng)的病毒復(fù)制，傳染性強(qiáng)，此情況可能為血清轉(zhuǎn)換期或前C區(qū)突變，如果經(jīng)過(guò)動(dòng)態(tài)觀察，仍表現(xiàn)HBsAg(+)HBcAb(+)及HBV?DNA陽(yáng)性，可能為前C區(qū)突變。在63例HBsAb(+)血清中，仍檢測(cè)出1例HBV-DNA陽(yáng)性，檢出率為1.6%,平均拷貝數(shù)為1.13E+08拷貝數(shù)/ml,6例HBcAb(+)血清中1例檢出HBV?DNA陽(yáng)性，檢岀率為16.67%,平均拷貝數(shù)300E+04拷貝數(shù)/ml,說(shuō)明HBsAb產(chǎn)生和HBeAg轉(zhuǎn)陰并不意味著病毒的復(fù)制停止或減弱。有學(xué)者認(rèn)為此現(xiàn)象有可能與HBV-DNA前C區(qū)發(fā)生突變有關(guān)，岀現(xiàn)“免疫逃逸”或不同亞型的HBV重
8、疊感染。也有學(xué)者的證明乙型肝炎HBsAb出現(xiàn)后，血清內(nèi)仍有DNA復(fù)制，隨著時(shí)間的推移HBV-DNA的檢岀率逐漸下降。62例
