乙肝表面抗原定量檢測(cè)與hbv-dna結(jié)果的相關(guān)性分析

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1、乙肝表面抗原定量檢測(cè)與HBV-DNA結(jié)果的相關(guān)性分析劉瑞菡1,2陳俊清1董亮3（通訊作者）（1孝感市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科湖北孝感432000）（2武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院湖北武漢430000；3孝感市中心醫(yī)院輸血科湖北孝感432000）【摘要】目的探討化學(xué)發(fā)光化法乙肝表面抗原定量測(cè)定與HBV-DNA水平及乙肝病毒標(biāo)志物模式之間相互關(guān)系。方法運(yùn)用化學(xué)發(fā)光法、熒光定量PCR（FQ-PCR）及EUSA三種方法同時(shí)檢測(cè)173清標(biāo)木，并對(duì)其結(jié)果應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法加以對(duì)比分析。結(jié)果173例患者血清HBsAg含量與HBV-DNA及乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理，顯示其具有良好的相關(guān)性。結(jié)論化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)HB

2、sAg能較準(zhǔn)確、快速地反映體內(nèi)乙肝病毒復(fù)制情況?！娟P(guān)鍵詞】乙肝表面抗原乙肝病毒DNA熒光定量PCR酶聯(lián)免疫吸附乙型肝炎病毒是危害最嚴(yán)重的病毒性肝炎之一,我岡是乙型肝炎病毒（HBV）感染的高發(fā)區(qū)，人群HBV感染率達(dá)60%左右，其中HBV攜帶率約占10%［1］。肝病毒感染的診斷主要依賴于測(cè)定血清中乙肝病毒抗原-抗體標(biāo)志物（乙肝兩對(duì)HBV-M）和乙肝病毒核酸（HBV-DNA）含量（熒光定量PCR檢測(cè)），將其作為臨床分析和判斷乙肝患者病情、療效及預(yù)后的主要依據(jù),但由于兩對(duì)半組合模式復(fù)雜多樣,導(dǎo)致部分患者的HBV感染復(fù)制狀況難以斷;HBV-DNA雖是乙肝病毒感染和復(fù)制的特異性指標(biāo)，表明其具有傳染

3、性的最有力的證據(jù)［2-3］，但受到實(shí)驗(yàn)室要求的嚴(yán)格限制，無(wú)法快速檢測(cè)。木文運(yùn)用化學(xué)發(fā)光法對(duì)173份清標(biāo)木HBsAg作出定量檢測(cè)，并結(jié)合HBV-DNA及兩對(duì)半結(jié)果，希望能對(duì)乙肝患者的臨床診斷、治療及預(yù)后提供及時(shí)、準(zhǔn)確的依據(jù)。1材料與方法1.1標(biāo)木來(lái)源:2012年3月至2012年5月間我院住院患者173例（主要是感染科、消化內(nèi)科的病人），留取靜脈血分離血清，-20°C保存?zhèn)錂z。1.2儀器及試劑:HBsAg定量檢測(cè)所用儀器系美國(guó)雅培公司的i2000SR免疫發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)，診斷試劑均由雅培公司提供;HBV-DNA測(cè)定儀系美國(guó)PerkinElmer公司的PE7000自動(dòng)熒光PCR儀，F(xiàn)Q2PCR試

4、劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，試劑盒的靈敏度為200copies/ml;HBV-MELISA診斷試劑盒由上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供1.3檢測(cè)方法：將-20°C冷凍保存的標(biāo)本取出解凍復(fù)融。173份按乙肝兩對(duì)半不同模式分為8組，見(jiàn)表1。用生理鹽水以不冋的稀釋倍數(shù)稀釋各組血清樣本:乙肝大三陽(yáng)組按1:500稀釋，乙肝小三陽(yáng)組和HBsAg(+)、HBcAb(+)組按1:20稀釋，其余組均以原倍檢測(cè)。將稀釋好的血清標(biāo)本嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，測(cè)定HBsAg含量，單位為IU/ml。1.4數(shù)據(jù)處理：將測(cè)得的各組HBV-DNA拷W數(shù)及HBsAg含量(IU/ml)進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，并以-x&plu

5、smn;s表示，以HBV-DNA對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo),HBsAg數(shù)值為縱坐標(biāo)，求線性冋歸及相關(guān)系數(shù)⑺。2結(jié)果(表-1)2.1HBsAg定量與乙肝兩對(duì)半及HBV-DNA檢測(cè)結(jié)果比較見(jiàn)表-1。2.2乙肝表面抗原含量與HBV-DNA相關(guān)性分析：以HBV-DNA為橫坐標(biāo),HBsAg為縱坐標(biāo)，發(fā)現(xiàn)二者存在明顯的正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)(r>=0.93,當(dāng)HBsAg>300IU/ml(102.5≈300),HBV-DNA即可出現(xiàn)陽(yáng)性。3討論化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫測(cè)定是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的一類免疫測(cè)定方法，其檢測(cè)結(jié)果具有靈敏度高、重復(fù)性好、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性佳、檢測(cè)快速、無(wú)放射性危害等優(yōu)點(diǎn)

6、［4-5】。雅培i2000SR系統(tǒng)是基于化學(xué)微粒子免疫分析(CMIA)檢測(cè)技術(shù)的全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)，以吖啶酯作為標(biāo)記發(fā)光劑，能夠?qū)σ腋蝺蓪?duì)半作出定量、準(zhǔn)確、快速的分析。本文應(yīng)用該系統(tǒng)對(duì)我院住院患者173例血清標(biāo)本，作乙肝表面抗原定量分析，發(fā)現(xiàn)其與乙肝兩對(duì)半HBV-DNA具有良好的相關(guān)性。乙肝大三陽(yáng)組45例中，44例HBV-DNA陽(yáng)性，表明HBV均奮活動(dòng)性復(fù)制［6-8】，我們測(cè)得的DNA陽(yáng)性組HBsAg含量為7.2±2.02IU/ml,其中1例HBV-DNA陰性患者，測(cè)得的HBsAg僅為2.85IU;36例小三陽(yáng)組中，19例HBV-DNA陽(yáng)性，說(shuō)明小三陽(yáng)患者只有半數(shù)左右人群

7、體內(nèi)含有HBV-DNA,而我們測(cè)得的19例HBV-DNA陽(yáng)性者HBsAg為3.13±1.30IU/ml,與DNA陰性者2.15±0.60IU/ml有顯著性差異，說(shuō)明小三陽(yáng)患者乙肝表面抗原的高低可反映體內(nèi)HBV活動(dòng)性復(fù)制的情況及水平;25例HBsAg(+)、抗-HBc(+)患者血清HBV-DNA陽(yáng)性率達(dá)48%,HBsAg測(cè)定值為3.01±0.64IU/ml,與小三陽(yáng)患者無(wú)明顯差異，可能為血清轉(zhuǎn)換期或前C區(qū)