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《納豆激酶分離提純方法中試研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、維普資訊http://www.cqvip.com第24卷第4期內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報Vd．242003年12月Dec．20o3JournalofInnerMongoliaAIculturalUniversity文章編號：1009—357512003)04—0o51—04納豆激酶分離提純方法中試研究李立民。。惠洪文。王明芳(1．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，呼和浩特010018；2．內(nèi)蒙古滿洲里市商檢局；3．內(nèi)蒙古呼和浩特市制藥廠)摘要：本文在中試規(guī)模上對納豆激酶(Nattokinase，NK；1種溶栓酶)發(fā)酵工程的下游主要工藝進(jìn)行了研究。對納豆枯草桿菌(}Ⅱ86)發(fā)酵液
2、中初步提取納豆激酶(NK)進(jìn)行了探討。通過加入CaCI~和NaCO~對發(fā)酵液的前處理、離心過濾、超濾濃縮、離子交換層析等操作之后．得到了較純的酶蛋白。整個過程．蛋白收率為17％，酶活性收率為61．74％。若再進(jìn)行適當(dāng)完善．本工藝則可以應(yīng)用于大規(guī)模的針劑型納豆溶栓酶的工業(yè)化生產(chǎn)。關(guān)鍵詞：納豆激酶；離心過濾；超濾濃縮；離子交換中圖分類號：Q814．1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：ASTUDYONPURIFICATIONOFNATTOKINASEFROMTHEB．NATTOFERMENTEDBROTH(LIQUOR)LILi—min。HUIHong—wen2．WANGMing—lane(
3、1．CollegeofBioengineering．InnerMongoliaAgricultureUniversity．Huhhot010018．China；2．C[粕m0dityInspectionofficeofManilx~uli，InnerMongoliaManzhouliChina3．HuhhotPharmaceuticalfactory．InnerMongolia，HuhhotChina)Abstract：Aprimaryindustrializedpurificationmethodofnattokinasewasreported．Nattokin
4、asewaSextractedfromABacillussubtilisnattostrain(HL986)fermentedbroth(1iquor)accordingtofollowingprocess：ferment—ingliquorwerepretreatedwithCaCI2andYaCO~beforecentrifugation，andNKwaSisolatedfl姍thesupernatebysequentialuseofsuper—filter。ion—exchangechromatography，andgel—filtration．Theiso
5、latedproteingaveasinglebandonSDS—PAGE(M．W≈30kd)．Theproteinyieldwas17％，andNKactivityrecoveryrateWas61．7％．Keywords：nattokinase；purification；super—filter；ion—exchangechromatography；gel—filtration目前，全世界有血栓栓塞性病人約1500萬．是嚴(yán)重威脅人類生命、身心健康的疾病之一。血栓栓塞性疾病主要有3種：1、冠狀動脈疾病形成血栓，主要指急性心肌梗死；2、腦血管疾病形成血栓，即腦血栓
6、，中風(fēng)；3、末梢動靜脈疾病形成血栓，即脈管栓塞。血栓栓塞性病人體內(nèi)的纖維蛋白原在凝血酶作用下生成纖維蛋白多肽A和纖維蛋白多肽B，兩種纖維蛋白多肽轉(zhuǎn)化成纖維蛋白單體(a，p，)：后自發(fā)聚合成不穩(wěn)定的纖維作薯者是簡羿介：李200立3民-器(1968一)，男，實驗師，硬士．從事生物化學(xué)及分子生物學(xué)方面的研究冗維普資訊http://www.cqvip.com52內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報20o3年蛋白多聚體，不穩(wěn)定的纖維蛋白多聚體在Ca2，Ⅷ因子的作用下交聯(lián)成穩(wěn)定的纖維蛋白多聚體，這就是血栓的主要基質(zhì)。溶栓劑是治療和預(yù)防血栓栓塞性疾病的重要藥物，它主要通過激活纖維蛋白溶解酶原轉(zhuǎn)化
7、成纖維蛋白溶解酶從而溶解血栓。纖維蛋白溶解酶還可以直接催化血栓的主要基質(zhì)纖維蛋白水解。近l0年來，對溶栓劑的推廣使用而使血栓栓塞性病人的病死率明顯下降，溶栓劑的潛在市場約20億美元，因此世界各國都致力于這方面的藥物研究開發(fā)【4】。韓潤林博士領(lǐng)導(dǎo)的開發(fā)課題組從1種日本納豆中分離出1種枯草桿菌，命名為HL986，可產(chǎn)生高水平的溶栓酶。經(jīng)過小試的嚴(yán)密試驗，進(jìn)一步進(jìn)行到中試階段。本文在中試規(guī)模上對納豆激酶(Nattokinase，NK；1種溶栓酶M．W≈30kd)發(fā)酵工程的下游主要工藝進(jìn)行了研究。1材料1．1發(fā)酵菌種枯草桿菌HL986(由中科院韓潤林博士提供)。1．2主要
8、藥品CM5
