【精品】薄層分析

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1、薄層色譜的概述薄層色譜是近年來發(fā)展起來的一種微量、簡單并能快速分離和定性分析少量物質(zhì)的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。適用于少量樣品（幾到兒十微克，甚至0.01ug）的分離；若在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚，將樣品點(diǎn)成一條線，則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此乂可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。此外，在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí)，常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。通常所說的薄層色譜一般是指吸附薄層色譜，可根據(jù)TLC所采用的涂層材料性質(zhì)的不同，其物理化學(xué)原理

2、也有所不同，可分為：（1）吸附薄層色譜。采用硅膠、氧化鋁等吸附劑鋪成薄層，利用吸附劑表面對(duì)不同組分吸附能力的差別達(dá)到分離的方法。（2）分配薄層色譜。由硅膠、纖維素鋪成薄層，不同組分在指定的兩和中有不同的分配系數(shù)。（3）離子交換薄層色譜。由含有交換活性基團(tuán)的纖維素輔成薄層。（4）排阻薄層色譜。利用樣品中分子大小不同，受阻情況不同加以分離，也稱疑膠薄層。此外，還有利用氫鍵能力的強(qiáng)弱而分離的聚酰胺薄層色譜等。吸附薄層色譜是使用最為廣泛的方法，其原理概扌舌起來是：由于混合物中的各個(gè)組分對(duì)吸附劑（固定相）的吸附能力不同，當(dāng)展開劑（流動(dòng)相

3、）流經(jīng)吸附劑時(shí)，發(fā)生無數(shù)次吸附和解吸過程，吸附力弱的組分隨流動(dòng)相迅速向前移動(dòng)，吸附力強(qiáng)的組分滯留在后，由于各組分具有不同的移動(dòng)速度，最終得以在固定相薄層上分離。）基本原理?薄層色譜法是將固定相吸附劑均勻地涂在玻璃板上制成薄層板，試樣屮的各組分在固定相和作為展開劑的流動(dòng)相之間不斷地發(fā)生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配過程。不同物質(zhì)上升的距離不同而形成彼此分開的斑點(diǎn)從而達(dá)到分離。薄層色譜可分為吸附薄層色譜（以硅膠氧化鋁等吸附劑）、分配薄層色譜（用硅藻土和纖維索等)和離子交換薄層色譜。TLC應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)薄層層析在化學(xué)中有許多重要用途，它

4、可用于：證實(shí)兩個(gè)化合物和同；測定混合物中組分的數(shù)目；決定適用于柱層析分離用的溶劑；監(jiān)控柱層析分離；檢查通過柱層析、結(jié)晶或萃取所達(dá)到的分離的有效程度；跟蹤一個(gè)反應(yīng)的進(jìn)程等；近年來，薄層層析法在藥物的合成、中草藥有效成分的分離分析等方面也得到了廣泛的應(yīng)用薄層色譜是目前最重耍的分析方法之一：具有學(xué)習(xí)快，容易掌握、便宜、靈活的特點(diǎn)?？呻S時(shí)改換展開劑、展開方向，隨時(shí)衍生、顯色、觀察、檢測，方法開發(fā)快；靈敏度及分辨率高、分離快速、操作方便、同時(shí)分離多個(gè)樣品、樣品預(yù)處理簡單、設(shè)備簡單等特點(diǎn)。薄層色譜法應(yīng)用在藥物領(lǐng)域的研究已趨成熟，尤其在質(zhì)控

5、方面已有許多的報(bào)道。采用TIC掃描法測定銀杏葉浸膏中白果內(nèi)酯的含量，可得到平均冋收率為99?83%(RSD二1.78%)的結(jié)果。且該法較高效液相色譜分析簡便易行，不需繁雜的前處理，精確度高，可用于銀杏葉浸膏的質(zhì)量控制［4］。采用同一塊薄層板，同一種展開劑可同時(shí)鑒定葛根、黃苓、黃連三味藥，并可采用薄層色譜掃描法對(duì)葛根索進(jìn)行定量。該法定性鑒別簡便快速、專屬性強(qiáng)、定量分析準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。利用薄層色譜掃描法測定冠心口服液中人參皂貳(Rgl)含量，結(jié)果令人滿--vr.綜上所述，薄層色譜是可以提供人量定性定量信息的方法之一，但對(duì)其色譜的質(zhì)

6、量應(yīng)進(jìn)行精心的研究，薄層色譜絕大多數(shù)為正相色譜，操作簡單，快速，可同時(shí)比較、鑒別多種樣品，獨(dú)具特色。經(jīng)數(shù)據(jù)處理，可得出各樣品積分值，適合原料藥材及復(fù)方制劑的分析，在優(yōu)化的規(guī)范操作條件下得到薄層色譜熒光彩色圖象，可以在同一板上形象地比較各樣品的異同。但由于受到薄層板的質(zhì)量和開放式層析系統(tǒng)或需顯色的斑點(diǎn)其顯色劑用量、加熱條件等外界因素的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果易產(chǎn)生一定的誤差。因此，薄層色譜法在屮藥研究屮的應(yīng)用述需進(jìn)一步加強(qiáng)研究。?薄層層析冇多中展開方式，可分為上行、下行、雙向展開等。展開時(shí)均需在密閉的容器（展開缸）中進(jìn)行，且該容器內(nèi)應(yīng)使流

7、動(dòng)和的蒸氣飽和。?（1）±行法：在缸中加入足夠量的展開劑，將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5?1.0cm（切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中），密封缸蓋，待展開前沿離薄板上端lcm時(shí)，取出薄層板，并用鉛筆輕輕畫下溶劑前沿，晾干。?（2）下行法：在展開缸的蓋子上裝一個(gè)小鉤，將展開的紙片鉤住，并通過一?濾紙條將展開劑和紙片連起來。待展開劑前沿離紙片下端lcm時(shí)?，取出紙片，并用鉛筆輕輕畫下溶劑前沿，晾干。?（3）雙向法：通常用于分離組分復(fù)雜的混合物。一般操作是取一塊方形的薄板,在角上點(diǎn)樣，展開后取岀晾

8、干。將薄板轉(zhuǎn)90度，換另一種展開劑再次展開，可取得較好的分離效果。（2）薄層板的制備；（3）點(diǎn)樣；（4）展開；（5）顯色，Rf值計(jì)算。分離部分儀器和試劑?載玻片，烘箱，燒杯，點(diǎn)樣毛細(xì)管，層析缸，鉛筆?硅膠G,1%偶氮苯對(duì)照品溶液，0.01%對(duì)■二甲氨基偶氮苯對(duì)照品溶液，偶氮苯