常用液相色譜柱的規(guī)范化使用與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序

常用液相色譜柱的規(guī)范化使用與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序

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1、頒發(fā)部門:新藥研發(fā)部(蓋章)生效日期:附件:0新編/修訂:新編SOP備注:SOP制定的理由:規(guī)范色譜柱的使用與管理;色譜柱標(biāo)準(zhǔn)化老化與再生;色譜柱常見問題分析與解決;通過SOP的實(shí)施,降低色譜柱使用成本,提高分析人員色譜柱使用與維護(hù)水平。作者:Chengrui審核:QTLFYJLFDSLLB批準(zhǔn):WYQ分發(fā):原料藥研究部制劑研究一部制劑研究二部制劑研究三部中試中心簽名及日期:目錄頁碼1.目的32.范圍3第22頁,共22頁3.責(zé)任34.定義35.程序3~256.相關(guān)文件257.參考資料258.其它25第22頁,共22頁1目的規(guī)范液相

2、色譜柱的使用與管理;液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)化老化與再生;剖析液相色譜柱常見問題與解決辦法。延長(zhǎng)色譜柱使用壽命,降低色譜柱使用成本。提高分析人員液相色譜柱使用與維護(hù)水平。2范圍本SOP適用于原料藥研究部、制劑研究一部、制劑研究二部、制劑研究三部、中試中心使用色譜柱的儀器分析操作人員及相關(guān)管理人員。3責(zé)任本程序由新藥研發(fā)部組織實(shí)施,并由相關(guān)部門經(jīng)理及藥學(xué)研究助理監(jiān)督,設(shè)備儀器操作人員具體執(zhí)行。4定義液相色譜柱:指用于液相色譜分離的柱形固定相,由柱管、壓帽/卡套、篩板(濾片)、填料、接頭等組合而成,可用于液相色譜分析與制備。色譜柱再生:指色譜柱

3、在非正常情況下,針對(duì)異?,F(xiàn)象及原因采取的一系列修復(fù)補(bǔ)救措施,以提高色譜柱柱效和延長(zhǎng)其使用壽命的處理過程。運(yùn)載溶劑(ShippingSolvent):指色譜柱生產(chǎn)廠商在柱出廠測(cè)試合格后飽和于色譜柱內(nèi)的合適溶劑,以利于運(yùn)輸保存,多與保存溶劑相同。保存條件(StorageConditions):指色譜柱生產(chǎn)廠商根據(jù)不同柱類型及其色譜柱填料的制備、鍵合、裝填、高壓定型、凈化干燥等工藝條件的不同要求而特別制定的色譜柱保存前凈化飽和的處理程序與儲(chǔ)存條件,包括凈化程序、凈化溶劑和保存溶劑、保存條件。保存溶劑(StorageSolvent):用于

4、保存色譜柱并指定了溶劑組成與比例的溶液。5程序5.1液相色譜柱的分類目前,我公司色譜分析涉及到的液相色譜柱主要有6大類,具體詳見5.2。5.2液相色譜柱的使用與保養(yǎng)(僅列舉常用分析柱)5.2.1液相色譜柱的老化處理與使用保養(yǎng)程序新購(gòu)色譜柱出廠前均采用適合的運(yùn)載溶劑(ShippingSolvent)飽和,密封,由于運(yùn)輸過程周期較長(zhǎng),柱床容易干涸,所以新柱使用前需重新飽和與老化。第22頁,共22頁若老化方法不正確或時(shí)間不夠,極易導(dǎo)致色譜柱在使用較短時(shí)間后即產(chǎn)生分離度下降、峰形變差、峰拖尾等柱效降低的情況。需根據(jù)色譜柱不同類型選擇不同飽

5、和與老化方法。1、普通C8及C18反相色譜柱(C8&C18Reversed-phasechromatographycolumn):(1)準(zhǔn)備新鮮超純水及色譜級(jí)乙腈或甲醇,沖洗色譜儀器系統(tǒng),保證儀器系統(tǒng)管路干凈。(新柱老化前,此步?jīng)Q不可忽略)(2)將色譜柱反向連接,不接檢測(cè)器。用水-有機(jī)相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速?zèng)_洗20~30min。(目的是沖洗出柱入口端無機(jī)雜物與篩板孔雜物,使篩板正常)(3)再將色譜柱正向連接,不接檢測(cè)器。用水-有機(jī)相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速?zèng)_洗

6、20~30min。(目的是沖洗出柱出口端無機(jī)雜物與篩板孔雜物,使篩板正常)(4)連接檢測(cè)器,開啟柱溫達(dá)30℃~40℃,用水-有機(jī)相(90:10~95:5),以0.3~0.6ml/min流速?zèng)_洗4h以上。(目的是充飽和色譜柱,去除柱內(nèi)空氣)(5)用水-有機(jī)相(10:90~5:95),以0.3~0.6ml/min流速?zèng)_洗2h以上[或在120min內(nèi)以水-有機(jī)相(95:5→0:100)梯度變化,以0.3~0.6ml/min流速?zèng)_洗]→再用100%有機(jī)溶劑,以0.3~0.6ml/min流速?zèng)_洗1h以上→最后用100%有機(jī)溶劑,以1ml/m

7、in流速?zèng)_洗1h以上。(目的是老化色譜柱)(6)在平衡前根據(jù)水相-有機(jī)相的比例,首先調(diào)整水-有機(jī)相的比例接近流動(dòng)相水相-有機(jī)相的比例,以1ml/min流速?zèng)_洗30左右(目的是相平衡過渡)。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽,決不可在柱老化后立即用流動(dòng)相平衡,必需先用90%以上水進(jìn)行預(yù)平衡30min以上,否則,會(huì)導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)析出結(jié)晶,嚴(yán)重時(shí)會(huì)將新柱永久不可逆地?fù)p壞。(7)然后更換成新制并經(jīng)0.45um濾膜過濾,超聲脫氣后的流動(dòng)相,按檢測(cè)方法平衡至少1h,待基線穩(wěn)定后,開始進(jìn)樣檢測(cè)。(8)由于是新柱首次使用,在進(jìn)樣完成后需立即對(duì)色譜柱進(jìn)行凈化

8、和有機(jī)溶劑飽和。方法是:用水-有機(jī)相(90:10~95:5),以0.6ml/min流速?zèng)_洗1h以上→再用水-有機(jī)相(90:10~95:5),以1ml/min流速?zèng)_洗30min以上第22頁,共22頁(或者采用溶劑梯度變化至100%有機(jī)相沖洗120mi

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