常用液相色譜柱的規(guī)范化使用與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

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1、******　　GMP文件文件題目常用液相色譜柱的規(guī)范化使用與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)及版本號(hào)SOP-QC-000-00起草人起草日期年月日復(fù)制份數(shù)2份審核人審核日期年月日頒發(fā)部門(mén)質(zhì)量管理部批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期年月日生效日期年月日分發(fā)部門(mén)質(zhì)量管理部、質(zhì)控室編訂依據(jù)實(shí)用中藥藥品檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)指南目　　的：規(guī)范液相色譜柱的使用與管理；液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)化老化與再生；剖析液相色譜柱常見(jiàn)問(wèn)題與解決辦法。延長(zhǎng)色譜柱使用壽命，降低色譜柱使用成本。提高分析人員液相色譜柱使用與維護(hù)水平。范　　圍：適用于使用高效液相色譜儀的儀器分析

2、操作人員及相關(guān)管理人員。責(zé)　　任：設(shè)備員、液相操作人員、質(zhì)控主管、質(zhì)量管理部經(jīng)理、質(zhì)量受權(quán)人。內(nèi)容：1.定義1.1液相色譜柱：指用于液相色譜分離的柱形固定相，由柱管、壓帽/卡套、篩板（濾片）、填料、接頭等組合而成，可用于液相色譜分析與制備。1.2色譜柱再生：指色譜柱在非正常情況下，針對(duì)異?，F(xiàn)象及原因采取的一系列修復(fù)補(bǔ)救措施，以提高色譜柱柱效和延長(zhǎng)其使用壽命的處理過(guò)程。1.3運(yùn)載溶劑：指色譜柱生產(chǎn)廠(chǎng)商在柱出廠(chǎng)測(cè)試合格后飽和于色譜柱內(nèi)的合適溶劑，以利于運(yùn)輸保存，多與保存溶劑相同。1.4保存條件：指色譜柱生產(chǎn)

3、廠(chǎng)商根據(jù)不同柱類(lèi)型及其色譜柱填料的制備、鍵合、裝填、高壓定型、凈化干燥等工藝條件的不同要求而特別制定的色譜柱保存前凈化飽和的處理程序與儲(chǔ)存條件，包括凈化程序、凈化溶劑和保存溶劑、保存條件。1.5保存溶劑：用于保存色譜柱并指定了溶劑組成與比例的溶液。1.6反相色譜柱：以鍵合非極性基團(tuán)的載體為填充劑填充而成的色譜柱。常見(jiàn)的載體有硅膠、聚合物復(fù)合硅膠和聚合物等。常用的填充劑有十八烷基硅烷鍵合硅膠、辛基硅烷鍵合硅膠和苯基鍵合硅膠等。1.7正相色譜柱：用硅膠填充劑，或鍵合極性基團(tuán)的硅膠填充而成的色譜柱，常見(jiàn)的填充

4、劑有硅膠、氨基鍵合硅膠和氰基鍵合硅膠等。1.8氨基柱（-NH2）：可以同時(shí)用于正相條件和反相條件，但多用于正相色譜條件。使用時(shí)需注意，正相反相交替使用時(shí)必需用異丙醇過(guò)度，保證柱保存溶劑與流動(dòng)相互溶。[氨基柱出廠(chǎng)保存溶劑多用正相溶劑，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。2.液相色譜柱的使用及保養(yǎng)第8頁(yè)共8頁(yè)******　　GMP文件文件題目常用液相色譜柱的規(guī)范化使用與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)及版本號(hào)SOP-QC-000-002.1普通C8及C8反相色譜柱的老化處理與使用保養(yǎng)程序新購(gòu)色譜柱出廠(chǎng)前均采用適合的運(yùn)

5、載溶劑飽和，密封，由于運(yùn)輸過(guò)程周期較長(zhǎng)，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新飽和與老化。若老化方法不正確或時(shí)間不夠，極易導(dǎo)致色譜柱在使用較短時(shí)間后即產(chǎn)生分離度下降、峰形變差、峰拖尾等柱效降低的情況。需根據(jù)色譜柱不同類(lèi)型選擇不同飽和與老化方法。2.1.1老化2.1.1.1老化前準(zhǔn)備：準(zhǔn)備新鮮的超純水及色譜級(jí)乙腈或甲醇，沖洗色譜儀器系統(tǒng)，保證儀器系統(tǒng)管路干凈。2.1.1.2將色譜柱反向連接，不接檢測(cè)器。用水-有機(jī)相（90：10～95:5），以0.3ml/min～0.6ml/min流速?zèng)_洗20min～30min

6、（目的是沖洗出柱入口端無(wú)機(jī)雜物與篩板孔雜物，使篩板正常）。2.1.1.3再將色譜柱正向連接，不接檢測(cè)器。用水-有機(jī)相（90：10～95:5），以0.3ml/min～0.6ml/min流速?zèng)_洗20min～30min（目的是沖洗出柱出口端無(wú)機(jī)雜物與篩板孔雜物，使篩板正常）。2.1.1.4連接檢測(cè)器，開(kāi)啟柱溫達(dá)30℃～40℃，用水-有機(jī)相（90：10～95:5），以0.3ml/min～0.6ml/min流速?zèng)_洗4h以上（目的是充飽和色譜柱，去除柱內(nèi)空氣）。2.1.1.5老化色譜柱：用水-有機(jī)相（10：90～5

7、:95），以0.3ml/min～0.6ml/min流速?zèng)_洗2h以上[或在120min內(nèi)以水-有機(jī)相（95:5→0:100）梯度變化，以0.3ml/min～0.6ml/min流速?zèng)_洗]；再用100%有機(jī)溶劑，以0.3ml/min～0.6ml/min流速?zèng)_洗1h以上；最后用100%有機(jī)溶劑，以1ml/min流速?zèng)_洗1h以上（不同品牌色譜柱需區(qū)別對(duì)待）。2.1.2使用2.1.2.1相平衡過(guò)渡:根據(jù)水相-有機(jī)相的比例，首先調(diào)整水-有機(jī)相的比例接近流動(dòng)相水相-有機(jī)相的比例，以1ml/min流速?zèng)_洗30min左右；

8、如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽，決不可在柱老化后立即用流動(dòng)相平衡，必需先用90%以上水進(jìn)行預(yù)平衡30min以上，否則，會(huì)導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)析出結(jié)晶，嚴(yán)重時(shí)會(huì)將新柱永久不可逆地?fù)p壞。2.1.2.2然后更換成新制并經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾，超聲脫氣后的流動(dòng)相，按檢測(cè)方法平衡至少1h，待基線(xiàn)穩(wěn)定后，開(kāi)始進(jìn)樣檢測(cè)。2.1.3維護(hù)與保養(yǎng)2.1.3.1新柱首次使用，在進(jìn)樣完成后需立即對(duì)色譜柱進(jìn)行凈化和有機(jī)溶劑飽和。方法是：用水-有機(jī)相（90：10～95:5），以0