大花美人蕉種子脫毒組培快繁技術(shù)探究

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1、大花美人蕉種子脫毒組培快繁技術(shù)探究摘要脫毒的大花美人蕉種子為外植體，采用不同的消毒時(shí)間及不同的培養(yǎng)基、切割方法等研究美人蕉的組織培養(yǎng),結(jié)果表明：美人蕉種子消毒時(shí)間在5月較12月萌發(fā)率要高30%-40%;BA濃度適度的提高，有利于側(cè)芽的分化；糖濃度對(duì)芽的分化生長有重要影響。通過不同的試驗(yàn)觀察，發(fā)現(xiàn)其中使用的3個(gè)配方：MS+2mg/LBA+8mg/LKT+0.2mg/LNAA,MS+8mg/LBA+2mg/LKT+0.2mg/LNAA,MS+8mg/LBA+0.1mg/LIAA+6%糖，能較好地誘導(dǎo)分化叢生芽，植株生長比較穩(wěn)定。關(guān)鍵詞花美人蕉；種子脫毒；組培快繁中圖分類號(hào)S682

2、.2+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1007-5739(2012)16-0178-01大花美人蕉(Cannageneralis),又名紅蕉曇花，原產(chǎn)于南美及亞洲的印度等地，為美人蕉科美人蕉屬多年生草本,具肉質(zhì)粗壯根莖?；ò曩|(zhì)地輕柔，直立而不反卷，葉叢高大、濃綠，花色艷麗，宜作花鏡背景或花壇中心栽植，也可叢植于草坪邊緣或綠籬前，展現(xiàn)其群體美，觀賞性強(qiáng)。連續(xù)的營養(yǎng)繁殖，易使病毒迅速傳播，受病毒侵染的植物全身終生帶毒，目前尚無藥物可治愈[1-2]o國內(nèi)外解決這一問題的有效途徑是培育無病毒苗，為加快大花美人蕉的無病毒化栽培繁殖速度，筆者于2006-2008年進(jìn)行了該品種的脫毒組培快繁技術(shù)研究

3、，采用現(xiàn)代生物技術(shù)方法對(duì)美人蕉種子進(jìn)行脫毒，再用組織培養(yǎng)法獲得無病毒種苗，進(jìn)一步建立無病毒種苗無性系并進(jìn)行快速繁殖，可迅速獲得大批量優(yōu)質(zhì)、無病毒美人蕉種苗，從而能夠從根本上解決美人蕉花葉病防治等問題。1材料與方法1.1供試材料美人蕉種子：從日本淤井種苗公司(Takii&Co.,Ltd.)購進(jìn)，挑選顆粒飽滿、無病蟲害、表面光滑的美人蕉種子,將材料在流水中沖洗干凈，放置于燒杯中待用。培養(yǎng)基與激素：MS培養(yǎng)基、1/2MS培養(yǎng)基、pH值5.6,2%~6%糖、8mg/LKT、0.1~8.0mg/LBA、0.1~0.5mg/LNAA、0.1mg/LIAA.結(jié)冷膠、瓊脂粉、肌1.2消毒處理

4、分2次進(jìn)行消毒處理其中一部分于2006年5月進(jìn)行消毒處理開始試驗(yàn)；剩余的冷藏處理，待2007年12月進(jìn)行消毒處理開始試驗(yàn)。1.3消毒方法將超凈工作臺(tái)及無菌工作室的紫外燈打開，照射20min后關(guān)閉紫外燈。操作前10min打開超凈工作臺(tái)，首先用70%酒精擦拭工作臺(tái)面及接觸器皿和雙手，將解剖刀、剪刀、鑲子放于95%酒精中浸泡2min后取岀，在酒精燈火焰上灼燒滅菌后備用。種子經(jīng)水洗后，浸泡30min,然后用75%酒精消毒30s,經(jīng)過無菌水清洗，再放入0.1%升汞中消毒7~8min浸泡時(shí)用鑲子輕輕攪動(dòng)，使其與滅菌液有良好的接觸。最后用無菌水清洗4?5次，接著把接種的培養(yǎng)瓶口在火焰上灼燒

5、滅菌，然后將消毒后的種子置于培養(yǎng)基中，蓋緊瓶蓋,將接種瓶放入培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，記錄觀察種子萌發(fā)狀況［3?4］。1.4培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度（28±2）°C:相對(duì)濕度70%~80%;光照強(qiáng)度為1500lx,光照時(shí)數(shù)10h/do2結(jié)果與分析2.1不同時(shí)間處理對(duì)種子萌發(fā)的影響消毒接種后,1周左右種子便開始萌發(fā)，根先出芽后生長。第1批種子（2006年5月消毒）萌發(fā)率很高，達(dá)到90%以上；而第2批種子（冷藏后于2007年12月消毒）的萌發(fā)率明顯下降，只有50%~60%。岀現(xiàn)此差異可能是與種子在冷藏過程中酶活性的下降有關(guān)。在萌發(fā)的種子中，有部分種子不發(fā)育成芽，因而不能形成完整的植株；這種現(xiàn)象在第2

6、批處理的種子中尤為明顯，而且芽萌發(fā)狀況不整齊，有的甚至需要2個(gè)月才形成完整植株。2.2激素對(duì)大花美人蕉種子培養(yǎng)的影響將完整的萌發(fā)芽去根后轉(zhuǎn)接在MS+0.1mg/LBA培養(yǎng)基中，植株生長正常，有大量的根系生成，但沒有萌發(fā)側(cè)芽，每4周轉(zhuǎn)接1次，連續(xù)進(jìn)行5次后，BA的濃度加至1-8mg/L,并添加了IAA、NAAO試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在BA濃度較低時(shí)，生長性能改變不大，無側(cè)芽萌發(fā)，即使偶爾有2~3個(gè)側(cè)芽的萌發(fā)，但在下個(gè)轉(zhuǎn)接周期中同樣沒有新芽的生成；當(dāng)BA濃度為8mg/L時(shí)，有側(cè)芽萌發(fā)的植株明顯增多，其中部分植株在下個(gè)生長周期中仍表現(xiàn)出有側(cè)芽萌發(fā)的現(xiàn)象。從以上試驗(yàn)可以看出：BA在一定范圍內(nèi)適度

7、濃度的提高，有利于側(cè)芽的分化，但是BA濃度的極限值，還有待做極端的試驗(yàn)進(jìn)行比較確定。按科學(xué)理論來推測，BA濃度并非越高越好,高濃度的BA反而會(huì)使分化率降低，芽體長勢(shì)細(xì)弱[5-6]oIAA、NAA對(duì)植株生長的影響不是很明顯，KT還有待進(jìn)一步試驗(yàn)2.3糖對(duì)大花美人蕉種子培養(yǎng)的影響在生產(chǎn)培養(yǎng)中，發(fā)現(xiàn)有些芽在轉(zhuǎn)接后葉片發(fā)褐，呈水浸狀死亡，有時(shí)甚至?xí)绊懙窖啃?，?dǎo)致材料死亡，在調(diào)整糖的濃度后，這種現(xiàn)象有所好轉(zhuǎn)。說明糖濃度對(duì)芽的分化生長有重要影響。2.4肌醇對(duì)大花美人蕉種子培養(yǎng)的影響對(duì)于肌醇是否有利于植株的生長，進(jìn)