島津20AT-液相培訓(xùn)

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1、島津20AT-solution儀器培訓(xùn)目錄色譜學(xué)基礎(chǔ)原理島津20AT儀器系統(tǒng)LC-solution工作站的操作儀器的維護(hù)培訓(xùn)色譜法：又稱(chēng)色層法和層析法，是一種物理化學(xué)分離和分析方法，這種分離方法是基于物質(zhì)溶解度、蒸汽壓、吸附能力、立體結(jié)構(gòu)或離子交換等物理化學(xué)性質(zhì)的微小差異，使其在流動(dòng)相和固定相之間的分配系數(shù)的不同，而當(dāng)兩相做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，組分在兩相間進(jìn)行連續(xù)多次分配，從而達(dá)到彼此分離。1906年，俄過(guò)科學(xué)家茨維特用石油醚、碳酸鈣分離葉綠素的試驗(yàn)被認(rèn)為是色譜法最早的應(yīng)用，色譜即由chroma(色彩)和graphos(圖譜)構(gòu)成，就是我們現(xiàn)在所用的

2、chromatography(色譜)一詞。色譜的工作原理液相色譜儀器系統(tǒng)溶劑傳輸系統(tǒng)高壓泵樣品引入系統(tǒng)進(jìn)樣器樣品分離系統(tǒng)色譜柱信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件流動(dòng)相的選擇在正相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而增加；在反相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而減弱。正相色譜的流動(dòng)相通常采用烷烴加適量極性調(diào)整劑。反相色譜的流動(dòng)相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇、乙腈、四氫呋喃等。流動(dòng)相的選擇乙腈的毒性是甲醇的5倍，是乙醇的25倍。價(jià)格是甲醇的6~7倍。100%甲醇的沖洗強(qiáng)度相當(dāng)于89%的乙腈/水。截止波長(zhǎng)乙腈190、甲

3、醇205、正己烷210、乙醚220、四氫呋喃225、二氯甲烷245、氯仿245nm。緩沖鹽流動(dòng)相注意點(diǎn)(1)現(xiàn)配現(xiàn)用.低溫下密封保存一般不超過(guò)3天。(2)確認(rèn)檢測(cè)波長(zhǎng)下緩沖液是否有大的吸收（在波長(zhǎng)210nm附近進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，不能用醋酸和檸檬酸的緩沖液）(3)緩沖液必須過(guò)濾膜。(4)使用緩沖液期間，用注射器推純水，清洗柱塞桿，延長(zhǎng)泵密封墊壽命。(5)工作完畢后及時(shí)沖洗LC系統(tǒng)內(nèi)的緩沖液。(6)梯度洗脫時(shí),確認(rèn)不同比列的緩沖液與有機(jī)溶劑能互溶。流動(dòng)相的過(guò)濾和脫氣流動(dòng)相的過(guò)濾濾膜類(lèi)型：聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)

4、溶劑，特別適用于水基溶劑。尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可以用于強(qiáng)酸，不適用于二甲基甲酰胺。再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機(jī)溶劑脫氣的目的1.防止由氣泡的產(chǎn)生引起的故障1）泵中氣泡使液流波動(dòng)，改變保留時(shí)間和峰面積2）柱中氣泡使流動(dòng)相繞流，峰變形2.防止由溶解（在液體中的）氣體量的變動(dòng)引起的檢測(cè)不穩(wěn)定程度1）示差折射率檢測(cè)器*使折射率變化2）UV檢測(cè)器（200nm以下）*溶解氧氣有吸收3）熒光檢測(cè)器*溶解氧氣有消光作用脫氣的方法1.減壓吸氣脫氣法*可以抑制配制流動(dòng)相時(shí)產(chǎn)生的氣泡*只是暫時(shí)的脫氣法*不能解決因

5、溶解氣體造成的問(wèn)題2.He清除法3.使用氟樹(shù)脂膜的減壓脫氣法4.超聲波脫氣法He清除法調(diào)壓閥排氣閥往送液泵流動(dòng)相過(guò)濾器使用氟樹(shù)脂膜的減壓脫氣法氟樹(shù)脂膜真空室往送液泵真空泵控制器流動(dòng)相液相系統(tǒng)流程圖吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過(guò)濾器進(jìn)樣器檢測(cè)器洗脫液梯度洗脫裝置高壓梯度洗脫低壓梯度洗脫1-四通；2-混合器泵控制器；3-高壓輸液泵；A,B,C-電磁比例閥，a,b,c-溶劑瓶1，2-泵；3，4-泵控制器；5-梯度程序控制器；6-混合器泵單元LC-20AT泵：串聯(lián)式往復(fù)泵LC-20AD泵：并聯(lián)式往復(fù)泵單向閥結(jié)構(gòu)拋光面透明塑料墊片寶石球吸液沖程排液沖程出

6、口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭流動(dòng)相單向閥原理吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭進(jìn)樣系統(tǒng)手動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器手動(dòng)進(jìn)樣器的原理圖裝填狀態(tài)進(jìn)樣狀態(tài)六通閥進(jìn)樣方式：部分裝液法：進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%（最多75％），并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。完全裝液法：進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的5~10倍（最少3倍），這樣才能完全置換定量環(huán)內(nèi)的流動(dòng)相，消除管壁效應(yīng)，確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度及重復(fù)性。注意事項(xiàng)：①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過(guò)濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過(guò)泵

7、的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過(guò)高的壓力將使柱頭損壞。③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)閥清洗接頭和注射器沖洗進(jìn)樣閥，防止交叉污染。自動(dòng)進(jìn)樣器注意事項(xiàng)：樣品瓶中應(yīng)有超過(guò)瓶高1/3的樣品量樣品瓶中樣品不要裝太滿，應(yīng)留有一定的空氣。使用與儀器配套的樣品瓶。色譜柱色譜柱的分類(lèi)：色譜柱按用途可分為分析型和制備型尺寸規(guī)格：①常規(guī)分析柱（常量柱），內(nèi)徑2~5mm（常用4.6mm，國(guó)內(nèi)有4mm和5mm），柱長(zhǎng)10~30cm；②窄徑柱（narrowbore，又稱(chēng)細(xì)管徑柱、半微柱semi-microcolumn），內(nèi)徑1~2mm，柱長(zhǎng)10~20

8、cm；③毛細(xì)管柱（又稱(chēng)微柱microcolumn），內(nèi)徑0.2~0.5mm④半制備柱，內(nèi)徑＞5mm；⑤實(shí)驗(yàn)室制備柱，內(nèi)徑20~40mm，柱長(zhǎng)10~30cm；C18硅