草莓葉片再生體系的研究

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1、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))論文題目姓名院系指導(dǎo)教師草莓葉片再生體系的研究于忠慧朱立武學(xué)號(hào)041301111067中國(guó)?合肥二OO八年六月安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文(設(shè)計(jì))開題報(bào)告課題名稱草莓葉片再生體系研究課題來源自選課題學(xué)牛姓名于忠慧專業(yè)園藝學(xué)號(hào)041301111067指導(dǎo)教師姓名朱立武職稱教授研究?jī)?nèi)容1?篩選草莓葉片組織培養(yǎng)分化適介的培養(yǎng)基;2?研究草莓葉片再生植株的培養(yǎng)途徑;3.分析不同草莓品種與植株再生的關(guān)系。研究計(jì)劃3.14?3.20填寫開題報(bào)告,藥品配制、培養(yǎng)基消毒;3.21?6.10外植休選取、接種,培養(yǎng)效果觀察記載;6.10?6.

2、15試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析,論文撰寫。特色與創(chuàng)新1?為利用草莓葉惻盤進(jìn)行轉(zhuǎn)基因研究提供基礎(chǔ)。2.本試驗(yàn)采用組織培養(yǎng)法,利用草莓葉片誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽,篩選適宜的培養(yǎng)基濃度,建立高效草莓葉片再生體系。指導(dǎo)教師意見同意開題,按計(jì)劃進(jìn)行試驗(yàn)。*3.10教研室啟、見院系見主要領(lǐng)導(dǎo)簽字:年月口草莓葉片再生體系的研究作者:于忠慧指導(dǎo)老師:朱立武(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院合肥230036)摘要:本試驗(yàn)為探索草莓抗除草劑bar基因高效轉(zhuǎn)化方法,就生產(chǎn)上廣為栽培的“豐香"草莓品種的試管苗為材料,就影響其植株再生的有關(guān)因子進(jìn)行探討,利用遺傳轉(zhuǎn)化手段提高其抗性,將克服常規(guī)育

3、種年限漫長(zhǎng)的弊端。在基因的遺傳轉(zhuǎn)化中,基因能不能成功轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵主要取決于是否有一個(gè)高效的離體再生系統(tǒng),為繼續(xù)對(duì)該品種的遺傳改良奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞:草莓葉片再生體系前言:草莓(Fsgd刃ddwmssQDuch)是一種薔薇科草莓屬(Fragarici)多年生草木植物,是世界上溫帶地區(qū)的一種重要水果。草莓是高效經(jīng)濟(jì)作物,在枇界各國(guó)小漿果生產(chǎn)屮,它的栽培面積及產(chǎn)量都一直處于首位。草莓具右栽培容易、當(dāng)年結(jié)果、產(chǎn)量高、經(jīng)濟(jì)效益好等優(yōu)點(diǎn),近10年來,我國(guó)草莓生產(chǎn)發(fā)展迅速,陸續(xù)培養(yǎng)出一批新品種,栽培面積迅速擴(kuò)大。但目前存在的問題是:優(yōu)良品種滿足不了生產(chǎn)規(guī)模的擴(kuò)大;

4、病毒病嚴(yán)重的影響草莓的產(chǎn)量和品質(zhì)。因此,利用生物技術(shù)尤其是轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)其進(jìn)行遺傳改良意義重大。草莓的生物技術(shù)研究與其它作物相比,進(jìn)展較慢,但隨著農(nóng)業(yè)生物技術(shù)的發(fā)展,有了長(zhǎng)足的進(jìn)步。目前,草莓的各種器官、組織和細(xì)胞的培養(yǎng)迅速發(fā)展起來,已開展了莖尖培養(yǎng)、葉片培養(yǎng)、花藥培養(yǎng)、胚培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等方面的研究,并取得了一定的進(jìn)展。葉片和匍匐莖的培養(yǎng)人多數(shù)是以兩種方式形成再生芽,一部分是rti愈傷組織形成層細(xì)胞局部快速分裂形成的;一部分不經(jīng)過愈傷組織直接經(jīng)表皮細(xì)胞脫分化形成的;鑒于組培苗葉片和匍匐莖外植體具有取材方便,便于保存和攜帶等諸多優(yōu)點(diǎn),范云六和張春

5、義認(rèn)為建立規(guī)?;?、成熟、高效的草莓遺傳轉(zhuǎn)化的再生體系,保證轉(zhuǎn)基因植物大量群體獲得,從而有利于轉(zhuǎn)基因性狀與其它農(nóng)藝性狀的組合篩選。姜國(guó)勇⑴以無菌實(shí)生苗的芽、葉片、葉柄分別接種在誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基上,比較了7種培養(yǎng)基所誘導(dǎo)的愈傷組織對(duì)不定芽分化的影響,結(jié)果由MS+6-BA1mg/L+IAAO.lmg/L所誘導(dǎo)的愈傷組織在分化培養(yǎng)基上不定芽分化率最高達(dá)81.9%。3種外植體由實(shí)生芽所形成的愈傷組織不定芽分化率最高,葉柄次Z,葉片最低,分別為70.0%、55.7%和49.9%o再生苗在MS+IBA1.0生根培養(yǎng)基上生根率為84.9%,SarwarU為根

6、的形成要在強(qiáng)光和有蔗糖的條件下才能完成。程林梅等以以草莓葉片和匍匐莖為材料誘導(dǎo)愈傷組織再生植株。選用“星都J“靜香"、“馬利亞"和''寶交"早生品種,結(jié)果表明:“星都"莖段在MS+B5+TDZ2mg/L+IAA0.1mg/L可高頻率誘導(dǎo)再生芽,再生頻率達(dá)100%。每個(gè)莖段再生芽10?15個(gè)。葉片再生頻率僅70%o“星都”品種匍匐莖再生遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)已形成,并可用于轉(zhuǎn)基因研究。迄今為止,草莓的葉片培養(yǎng)研究已取得了一定的進(jìn)展,但仍存在著很多亟待解決的問題。首先,草莓基因型對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響很人,是影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率的一個(gè)重要因素。因此,要收集更廣泛的不同

7、基因型品種,以便篩選出容易再生的基因型進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。其次,目前以葉盤為轉(zhuǎn)基因受休的系統(tǒng)所得到的不定芽多采用愈傷組織途徑分化而來,直接由器官發(fā)生或經(jīng)胚狀體途徑發(fā)生而來的還少見甚至未見報(bào)道。而后者有利于解決遺傳轉(zhuǎn)化過程中的嵌合體問題,因此有必要進(jìn)行進(jìn)-步研究。再次,不同的草莓品種對(duì)不同種類、不同質(zhì)量濃度的抗生素及抑菌素要求有界。因此,應(yīng)加大這方面的研究,為轉(zhuǎn)基因的順利進(jìn)行奠定基礎(chǔ)。此外,有關(guān)草莓離休葉片發(fā)生不定芽的內(nèi)在機(jī)理還不甚清楚,有待于進(jìn)一步研究。1材料與方法1」材料藥品:嗓苯隆(TDZ)、6■節(jié)氨基瞟吟(6?BA)、a蔡乙酸(NAA)、口引卩朵

8、丁酸(IBA)均購自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。電子天平:上海精科天平的FA1104上皿天平;低溫冰箱「70°C的SANYO(MD

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