淺談流感病毒檢驗(yàn)

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1、淺談流感病毒檢驗(yàn)淺談流感病毒檢驗(yàn)【中圖分類號(hào)】R446【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-2720（2010）08-67-01流行性感冒病毒,簡稱流感病毒，是一種造成人類及動(dòng)物患流行性感冒的RNA病毒，在分類學(xué)上，流感病毒屬于正黏液病毒科,它會(huì)造成急性上呼吸道感染，并借市空氣迅速的傳播,在世界各地常會(huì)有周期性的大流行。流行性感冒病毒在免疫力較弱的老人或小孩及一些免疫失調(diào)的病人會(huì)引起較嚴(yán)重的癥狀，如肺炎或是心肺衰竭等。病毒最早是在1933年由英國人威爾遜•史密斯（WilsonSmith）發(fā)現(xiàn)的,他稱為H1N1。H代表血凝索;N代表神經(jīng)氨酸酶。數(shù)字代表不同

2、類型。1病毒的核心病毒的核心包含了存貯病毒信息的遺傳物質(zhì)以及復(fù)制這些信息必須的酶。流感病毒的遺傳物質(zhì)是單股負(fù)鏈RNA,簡寫為ss-RNA,ss-RNA與核蛋白（NP）向結(jié)合，纏繞成核糖核蛋白體（RNP）,以密度極高的形式存在。除了核糖核蛋白體，還有負(fù)責(zé)RNA轉(zhuǎn)錄的RNA多聚酶。甲型和乙型流感病毒的RNAFtl8個(gè)節(jié)段組成，丙型流感病毒則比他們少一個(gè)節(jié)段，第1、2、3個(gè)節(jié)段編碼的是RNA多聚集酶，第4個(gè)節(jié)段負(fù)責(zé)編碼血凝素；第5個(gè)節(jié)段負(fù)責(zé)編碼核蛋白，第6個(gè)節(jié)段編碼的是神經(jīng)氨酸酶；第7個(gè)節(jié)段編碼基質(zhì)蛋白，第8個(gè)節(jié)段編碼的是一種能起到拼接RNA功能的非結(jié)構(gòu)蛋白，這種蛋白的苴

3、他功能尚不得而知。丙型流感病毒缺少得是第六個(gè)節(jié)段，其第四節(jié)段編碼的血凝素可以同時(shí)行使神經(jīng)氨酸酶的功能。2樣本采集2.1采樣液Hank平衡鹽、細(xì)胞培養(yǎng)液、牛肉浸液（小牛肉浸膏10g＞牛血清白蛋白2g,加蒸惚水至400ml.慶大霉素40mg.多粘菌素BO.8mg,過濾除菌）等均可作采樣液。2.2采集鼻咽腔拭子標(biāo)本（1）咽拭子:用棉簽擦拭雙側(cè)扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部侵入2?3ml采樣液屮。（2）鼻咽抽取物:用與負(fù)壓泵和連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插人鼻腔、接通負(fù)壓,旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液刷洗收集器3次。⑶含漱液:用8~10以采

4、樣液漱口。2.3收集血清標(biāo)本血清標(biāo)本應(yīng)包括急性期和恢復(fù)期雙份血清。急性期應(yīng)在發(fā)病7天內(nèi)采集，恢復(fù)期則在發(fā)病后2?4周采集。血液標(biāo)木以2500r/min離心15min,收集血清，棄血凝塊。2.4標(biāo)木運(yùn)送病毒分離標(biāo)木采集后應(yīng)立即低溫保存，應(yīng)盡快送至實(shí)驗(yàn)室。24?48h內(nèi)樣品可置4°C保存，如48h內(nèi)未能進(jìn)行接種，應(yīng)置-70°C或以下保存。血清標(biāo)本可在4匯存放一周，在-20°C長期保存。2.5標(biāo)木處理咽拭了標(biāo)木，收集管于混合器充分震蕩，用無菌銀子取出棉拭子并在管壁上反復(fù)擠壓棉拭子后棄拭子，標(biāo)本加入雙抗（青霉素、鏈霉素）終濃度為1000IU/ml,混勻置4°C2h方可接種或

5、低溫保存;含漱液標(biāo)本，混勻后自然沉淀，取上清液3ml,加雙抗;鼻咽抽取物標(biāo)本，取無菌毛細(xì)吸管將洗液反復(fù)吹打，把粘液打散，而后按上述方法進(jìn)行處理;器官組織標(biāo)本，先用無菌的乳缽磨碎，用牛理鹽水配成20%懸液,2000r/min離心lOmin,取上清液3ml按上述方法進(jìn)行抗菌處理。3檢驗(yàn)方法3.1材料與方法3.1.1器材孵卵箱（38°C、33?35°C:各一個(gè)）、照卵器、卵盤、注射器、消毒劑、銀子、無菌生理鹽水、毛細(xì)吸管、試管、液體石蠟和封口膠等。3.1.2方法當(dāng)今國內(nèi)外常用狗腎傳代細(xì)胞（MDCK）o將已長成單層的細(xì)胞管棄生長液,用含有100IU/ml雙抗HanKJs液洗

6、2遍，用0.2?0.4ml處理過的標(biāo)木液接種于細(xì)胞管,每份標(biāo)本接種4管，置35T吸附1?2h后棄標(biāo)木液，加入病毒培養(yǎng)液，其量為生長液的2倍。如標(biāo)木液清亮和進(jìn)行病毒傳代吋，可不必吸附，直接加入。置33?35°C孵育7do從笫3d開始觀察細(xì)胞病變（CPE）,如細(xì)胞出現(xiàn)顆粒增多、變圓、脫落達(dá)+++~++++吋進(jìn)彳亍收獲。如果7d還不出現(xiàn)CPE,可收集病毒培養(yǎng)液做血細(xì)胞凝集試驗(yàn)，在做試驗(yàn)前將細(xì)胞管凍融1?2次，以提高病毒滴度。陽性者可測(cè)定其血凝滴度并鑒定之，陰性者混合4管細(xì)胞液盲傳2代，仍為陰性則棄去。2.2病毒鑒定新分離的病毒可用血細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和中和試驗(yàn)

7、等方法進(jìn)行鑒定。最常用和簡單的方法是血細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn),必要吋采用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。2.3快速診斷流感病毒的主要感染部位是呼吸道上皮細(xì)胞，在病人呼吸道標(biāo)本的脫落細(xì)胞中含有流感病毒抗原,通過直接檢查脫落上皮細(xì)胞內(nèi)抗原即可診斷。標(biāo)本最好采用負(fù)壓抽吸法收集呼吸道分泌物。3.4血清學(xué)診斷病毒分離是診斷流感最常用的方法之一,如因各方面因素未分離出病毒，血清學(xué)亦可作為一種代替手段，但必須收集急性期和恢復(fù)期雙份血清，如恢復(fù)期血清特異性抗體較急性期增高4倍或以上，即可診斷。本章介紹兩種常用的方法:血凝抑制試驗(yàn)和中和試驗(yàn)。4小結(jié)流行性感冒病毒(influenzavirus)簡稱流感病