豬精液冷凍保存的研究概況

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1、近年來(lái),為了捉高豬冷凍精液解凍后活力和受精能力,減少冷凍精液與鮮精之間的差距。國(guó)內(nèi)外科研工作者進(jìn)行了多方面、多途徑深入系統(tǒng)的研究。國(guó)外報(bào)道了較多關(guān)于稀釋液屮添加糖類(lèi)、抗氧化物質(zhì)、蛋白質(zhì)等對(duì)豬冷凍精液品質(zhì)彩響的研究。國(guó)內(nèi)對(duì)豬精子冷凍保存的研究,主要集屮于冷凍方法和甘油作為冷凍保護(hù)劑方面的研究。周佳勃等、李青旺等和索永善等和索永善等,均對(duì)冷凍程序、冷凍方法和甘油等抗凍劑的不同添加量對(duì)豬精子凍后活力的彩響進(jìn)行過(guò)詳細(xì)的研究。其最終目的都是為了能建立起一套完善的豬精液冷凍體系,從而提高冷凍一解凍后豬精液的受精率。1.1豬精液冷凍程序

2、豬精液的冷凍保存主要包括降溫、冷凍、解凍等過(guò)程。1.1.1降溫豬精子對(duì)溫度極敏感,特別是低于15紇時(shí),精子易受低溫打擊或發(fā)生冷休克。長(zhǎng)期以來(lái)一般采用調(diào)節(jié)平衡時(shí)間來(lái)控制降溫速度,還可以向稀釋液屮加入抗冷休克物質(zhì)盡可能降低對(duì)精子的損傷。豬精子對(duì)低溫打擊和冷凍都非常敏感,但隨著平衡時(shí)間的延長(zhǎng),對(duì)低溫打擊的抵抗能力逐漸增強(qiáng),所以目前多采用在4?6h內(nèi)緩慢降溫至40C?5紇。Jhonson等報(bào)道,延長(zhǎng)50C平衡時(shí)間能夠明顯捉高抗低溫打擊的能力。精子在從59向一59—一149降溫過(guò)程中,由于抗凍保護(hù)劑的存在往往處于一種過(guò)冷狀態(tài),這個(gè)過(guò)

3、程若降溫過(guò)快,急劇的溫度和滲透壓改變會(huì)造成精子嚴(yán)重?fù)p傷?,F(xiàn)在一般認(rèn)為以l°C/niin的速率緩慢降溫叮使精子內(nèi)水分在胞外水分結(jié)冰后冇充分的時(shí)間流出而防止冰晶形成。對(duì)抗冷休克物質(zhì)的研究比較多。脫脂乳、蛋黃用的是最多最普遍,月?發(fā)現(xiàn)0EP(氨基一鈉一十二烷硫酸酯)和B環(huán)糊精的添加更能增強(qiáng)蛋黃的抗冷休克保護(hù)作用,卵黃屮的卵磷脂和低密度脂蛋白等成分在精子冷凍解凍中對(duì)精子起到了保護(hù)作用。1.1.2冷凍對(duì)豬精子的損傷在精液的冷凍過(guò)程屮,當(dāng)溫度降低到大約一5乜時(shí),細(xì)胞內(nèi)外的水分均不會(huì)形成結(jié)品而處于過(guò)冷狀態(tài)。隨著精液溫度的進(jìn)一步降低(-1

4、0°C),細(xì)胞外的水分開(kāi)始形成冰晶,而細(xì)胞內(nèi)的水分也即將固化。由于冰晶的機(jī)械性刺激,對(duì)細(xì)胞I占I有結(jié)構(gòu)產(chǎn)生一系列損害。當(dāng)精液溫度處于-10-5°CZ間時(shí),冰品首先在細(xì)胞外的電解質(zhì)屮形成,而細(xì)胞內(nèi)的水分仍然保持過(guò)冷狀態(tài)而未形成冰品。冰品的形成會(huì)造成精細(xì)胞的機(jī)械性傷害,且這種損傷是不可逆的。廿油的冷凍效果相對(duì)于其它冷凍劑較好,但甘油濃度、冷凍一解凍速率7、滲透壓等Z間存在一種很微妙的相互關(guān)系,必須I■辦調(diào)才可能達(dá)到最好的冷凍解凍效果。目前認(rèn)為適合豬精了的最佳方案是甘油濃度2-3%,冷凍速率-30°C/min,解凍速率1200°

5、C/min,420-580Mosm/kg為最佳滲透壓。1.1.3解凍能否迅速越過(guò)危險(xiǎn)溫區(qū)的解凍速度是影響精了存活的一個(gè)重要因素。解凍速度對(duì)精了頂體的影響主要由甘油濃度引起,以最優(yōu)化的冷凍速度冷凍的精了在緩慢解凍或快速解凍后只有少數(shù)能夠恢復(fù)活力,這表明精子在緩慢降溫的過(guò)程中受到嚴(yán)重的損傷。選擇合適的解凍液是提高精液解凍后活率的關(guān)鍵要素。冃前的解凍液人致分為兩類(lèi):一類(lèi)是含蛋口質(zhì)解凍液。例如精清被認(rèn)為是一種基木的解凍液,在精清中解凍精了既能提高精了存活率,又能改善精了在母畜生殖道內(nèi)的運(yùn)動(dòng),提高受精率。但精清對(duì)于凍融公豬精子受精率

6、的作用機(jī)理冃前仍不清楚。另一類(lèi)是含鹽類(lèi)的解凍液。冃麗最常用的解凍液都以含鹽溶液為主,包括BTS解凍液、llwlscmbcrg解凍液、OLEP解凍液等。1.1.4豬凍精的受精結(jié)杲豬精液冷凍保存最主要的FI的就是滿足人工授精的需求,然而冃前人工授精后的結(jié)果并不令人滿意。造成這種結(jié)果的原因主要有兩方面:一方面是豬人工授精要求的劑量高達(dá)20?30億精了,而大多數(shù)凍精的包裝類(lèi)型(如0.25mlstraw、0.5mlstraw、FlatPeike等)遠(yuǎn)不能滿足其要求:另一方面是凍精質(zhì)量不高,凍后活率還達(dá)不到牛的水平,且輸精后許多活率低

7、或運(yùn)動(dòng)能力差的精了在沒(méi)有到達(dá)輸卵管壺腹部與卵了相遇時(shí)就己死亡。為了解決這些問(wèn)題,近年來(lái)國(guó)外許多專(zhuān)家都在致力于這方面的探索研究。例如,開(kāi)發(fā)大容量的包裝形式,進(jìn)行了宮內(nèi)輸精等,以提高授精效果。1.2精液稀釋液與添加劑豬精液稀釋液是指為了進(jìn)行有效的保存、運(yùn)輸和擴(kuò)大豬精液的利用,向采得的精液中添加一定數(shù)量的、按特定配方配制的、適宜于精子存活并保持授精能力的化學(xué)物質(zhì)。一般有以卜?幾類(lèi)物質(zhì):一是稀釋劑,用以擴(kuò)大精液容量,此類(lèi)物質(zhì)必須保證整個(gè)稀釋液與精液具有相同或相似的滲透壓;二是營(yíng)養(yǎng)劑。精了在保存過(guò)程中不停地進(jìn)行新陳代謝作用,為了補(bǔ)充

8、精子的能量消耗,向精液中添加最簡(jiǎn)單的能量物質(zhì),以補(bǔ)充消耗的能源;三是保護(hù)劑。保護(hù)精了不受各種不良環(huán)境因素的危害而添加的物質(zhì),包括緩沖物質(zhì)、防冷刺激物質(zhì)、抗凍物質(zhì)和抑菌物質(zhì);四是其他添加劑,改善精子所處壞境的理化特性,提高授精機(jī)會(huì)。1.2.1精液冷凍保存稀釋液稀釋液是精子的保護(hù)劑,對(duì)精液冷凍的效果有決定性

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