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1、嬰兒肺炎沙眼衣原體培養(yǎng)的臨床分析嬰兒肺炎沙眼衣原體培養(yǎng)的臨床分析摘要:我院182例嬰兒鼻咽拭子細(xì)胞培養(yǎng)沙眼衣原體22%(40/182)呈陽性，筆者認(rèn)為鼻咽拭子與鼻咽部抽吸物培養(yǎng)效果相當(dāng),前者更適宜于臨床應(yīng)用；另從標(biāo)本采集與貯藏溫度角度提出方法學(xué)改進(jìn)以提高培養(yǎng)的靈敏度，總結(jié)出嬰兒沙眼衣原體肺炎常見的特征性癥狀體征，從而引起兒科醫(yī)師對(duì)本病的高度重視。關(guān)鍵詞:沙眼衣原體;嬰兒;肺炎;細(xì)胞培養(yǎng)中圖分類號(hào):R374+.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1673-2197(2009)06-0073-02沙眼衣原體(ChlamydiaTrachomatis,CT)是西方發(fā)達(dá)國(guó)家最常見的性病病原體［
2、1］,嬰兒CT感染主要是通過被感染的產(chǎn)道獲得。宮頸CT感染者其陰道產(chǎn)兒60%?70%可被感染，其中20%?50%發(fā)生包涵體結(jié)膜炎，10%?20%發(fā)生CT肺炎［2］。為探討嬰兒CT肺炎的發(fā)病情況及臨床特點(diǎn)，筆者對(duì)我院2007年6月-2008年5月收治的182例肺炎患兒進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室檢查及臨床分析。1資料和方法1.1資料1.1.1研究對(duì)象2007年6月-2008年5月，于本院就診的肺炎患兒182例，其中男嬰110例，女嬰72例;剖宮產(chǎn)兒31例。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡2周-3月；病史和體檢診斷為感染性肺炎;X胸片證實(shí)為肺炎。1.1.2主要材料McCoy細(xì)胞株(小鼠細(xì)胞)為本室保存,RP-MI
3、1640培養(yǎng)基，胎牛血清。1.2檢測(cè)方法按美國(guó)CDC推薦方法并略作改良［3］:1.2.1標(biāo)木米集①鼻咽拭子:將套上無菌小塑料管的特制竹簽脫脂棉拭子經(jīng)鼻前庭插入鼻咽部，用力旋轉(zhuǎn)約5s后立即退入塑料管內(nèi)，隨管一并取出以免被鼻腔內(nèi)細(xì)菌污染;②鼻咽抽吸物:將無菌新生兒胃管經(jīng)鼻插入鼻咽部，用20mL無菌空針抽吸，見抽吸物量>0.2mL后拔管，將所采集的標(biāo)本充分混懸于2SP轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中，擠盡液體棄去棉拭子。不能在8h內(nèi)接種者置-70C保存。1.2.2細(xì)胞培養(yǎng)(1)單層細(xì)胞的準(zhǔn)備。培養(yǎng)瓶中&長(zhǎng)良好的McCoy細(xì)胞用0.02%EDTA消化后，加入RPMI1640培養(yǎng)液均勻混懸細(xì)胞，以ImL分
4、裝于24孔培養(yǎng)板中，使細(xì)胞濃度為1X105/mL?2X105/mL,36°C0.5%C02孵箱內(nèi)孵育48h,使Z長(zhǎng)為均勻融合的細(xì)胞單層。(2)標(biāo)本接種、培養(yǎng)。冰壺保存者直接接種。-70°C保存者先用37°C水浴融解，再用滴管用力吹打標(biāo)本后，接種于準(zhǔn)備好的細(xì)胞單層,3000rpm35°C離心lh,再35°C孵育2h,棄上清換含防線菌酮(lng/L)和70g/L聚乙二醇的1640培養(yǎng)基,36°C5%C02下孵育48h后,-70°C凍融3次再盲傳2代。(3)碘染色、鏡檢。棄培養(yǎng)液用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2次，以無水甲醇固定lOmin后加過濾的
5、John氏染液ImL染色20~30min,1:1碘甘油封固。在400倍光學(xué)顯微鏡下發(fā)現(xiàn)被染色細(xì)胞胞漿中有棕黑色包涵體者為陽性。所有鏡檢均在盲傳后48?72h內(nèi)完成。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理x2檢驗(yàn)(SAS統(tǒng)計(jì)軟件)o2結(jié)果2.1鼻咽拭了培養(yǎng)182例鼻咽拭了培養(yǎng)中，除去被細(xì)菌污染的17例,CT培養(yǎng)陽性率為23.6(40/165)。臨床特點(diǎn)如下:①剖宮產(chǎn)兒CT均陰性?而非剖宮產(chǎn)兒CT陽性率27.2%(40/147),差異有顯著性，X2=15.13,P<0.01;②低熱(腋溫37.5°C~38°C或24h內(nèi)體溫波動(dòng)>1°C)24例(60.0%)，
6、無熱15例(37.8%),僅2例高熱(2.5%):③處例均有呼吸增快,34例(85.0%)有陣陣單咳,28例(70.0%)有紫纟甘,27例(67.5%)有中細(xì)濕?音,7例(17.5%)有喘鳴音;④16例(40.0%)有結(jié)膜炎或結(jié)膜炎史;⑤X線胸片均顯示不同類型的浸潤(rùn)陰影,肺紋理增粗,33例(82.5%)有過度充氣;⑥平均病理期為21do2.2鼻咽拭子與鼻咽抽吸物培養(yǎng)結(jié)果對(duì)63名患兒作自身配對(duì)經(jīng)左右鼻孔同吋取鼻咽拭了和鼻咽抽吸物培養(yǎng)，前者CT陽性11例(17.46%)，略高于后者10例(15.87%),經(jīng)x2檢驗(yàn)兩者污染率x2=0.3
7、15,P>0.05及陽性率x2=0.05,P>0.05之間無顯著差別。3討論細(xì)胞培養(yǎng)是確診CT感染的傳統(tǒng)金標(biāo)準(zhǔn)，其特異性為100%,可從以下兩方面提高培養(yǎng)的陽性率:①標(biāo)本采集:CT肺炎的診斷以從呼吸道獲取標(biāo)本為主，可為鼻咽拭子和氣管或鼻咽抽吸物,3者中以氣管抽吸物的特異性最好，但取材困難，需借助喉鏡或支氣管鏡,鼻咽抽吸物和鼻咽拭子取材則較容易,對(duì)診斷CT肺炎亦有較高特杲性。本實(shí)驗(yàn)鼻咽拭子陽性率高的原因，主要是采樣時(shí)均用無菌塑料管套住拭了，防止了鼻腔內(nèi)其它菌污染拭子;②標(biāo)本貯藏溫度:
