純化水微生物限度檢查法驗證

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1、目錄A、驗證方案1?概述2.適用范圍3.驗證目的4.驗證小組及職責分工4.1驗證小組4.2職責分工5.驗證內容6.漏項與偏差及采取的糾偏措施.7.驗證結論8.驗證方案批準B、驗證報告1.概述2.適用范圍3.驗證目的4?驗證小組及職責分丁4.1驗證小組4.2職責分工5.確證內容6.漏項與偏差及采取的糾偏措施.7.驗證結論8.最終批準9.再驗證周期與年度回顧性驗證1概述山于某些供試品抗菌活性，在建立測定方法或原測定法的檢驗條件發(fā)生改變時，可能影響檢驗結果的準確性，必須對供試品的抑菌活性及測定方法的可靠性、重現(xiàn)性進行驗證。驗

2、證時,按供試液的制備和細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)所規(guī)定的方法進行。對各試驗菌的回收率應逐一進行驗證。2適用范圍純化水微生物限度檢查一一薄膜過濾法的驗證。3驗證目的驗證純化水微生物限度檢查——薄膜過濾法符合《中國藥典》2005年版二部的規(guī)定要求。4驗證小組及職責分工成員職責組長負責驗證期間各部門的協(xié)調及整個驗證過程的具體實施中心化驗室負責驗證方案的起草及具體實施，確保驗證過程能按方案規(guī)定的程序進行，對各種驗證資料(驗證結果)應及時交與GMP組相關人員整理；負責驗證方案的編寫規(guī)范；負責各種驗證資料(檢查結果)的收集整理。質量保

3、證部負責驗證方案的審核及批準；負責出具檢驗報告；并対微生物限度檢查環(huán)境進行檢測；負責驗證文件的管理。5驗證內容5.1品種：純化水5.2驗證方法：《中國藥典》2005年版二部微生物限度檢查——薄膜過濾法5.3計數(shù)方法的驗證5.3.1驗證試驗用菌種驗證試驗用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代，并采用適宜的菌種保藏技術，以保證試驗菌株的牛物學特性。大腸埃希菌(Escherichiacoli)(CMCC(B)44102)金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC(B)2

4、6003)枯草芽砲桿菌(Bacillussubtilis)(CMCC(B)63501)白色念珠菌(Candidaalbicans)(CMCC(F)98001)黑曲霉(Aspergillusniger)(CMCC(F)98003)5.3.2菌液制備取經(jīng)32.5°C培養(yǎng)18?24小時的人腸埃希菌、金黃色匍萄球菌與枯草芽孑包桿菌營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)物，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)為50?lOOcfu的菌懸液。取經(jīng)25.5°C培養(yǎng)24?48小時的白色念珠菌改良馬丁培養(yǎng)物，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)為5

5、0?lOOcfu的菌懸液。取經(jīng)25.5°C培養(yǎng)5?7天的黑曲霉改良馬丁斜而培養(yǎng)物，加0.9%無菌氯化鈉溶液3?5ml,將淪子洗脫°然后，吸出抱子懸液至無菌試管內，用9ml0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml含50?lOOcfu的抱子懸液。5.3.3供試液制備取純化水lml,加pH值7.0無菌氯化鈉-蛋白腺緩沖液至100ml,混勻，分別人工污染上述5種代表試驗菌株。5.3.4回收率測定⑴試驗組取純化水lml,加PH值7.0無菌氯化鈉-蛋白月東緩沖液至100ml,混勻，過濾。過濾完畢后加入50?lOOcfu試驗菌，過濾，按薄

6、膜過濾法測定其菌數(shù)。(2)菌液組測定所加的試驗菌數(shù)。(3)供試液對照組取規(guī)定量供試液,按菌落計數(shù)法測定供試品木底菌數(shù)。⑷稀釋劑對照組川相應的稀釋液替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每lml供試液含50?lOOcfu,按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。5.3.5試驗結果試驗組菌落計數(shù)(cfu/ml)實驗次數(shù)大腸埃希菌金黃色裔萄球菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌黑曲霉123平均菌落數(shù)菌液組菌落計數(shù)(cfu/ml)實驗次數(shù)大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽砲桿菌白色念珠菌黑曲霉123平均菌落數(shù)供試品對照組菌落計數(shù)(c

7、fu/ml)實驗次數(shù)大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽抱桿菌口色念珠菌黑曲霉3平均菌落數(shù)稀釋劑對照組菌落計數(shù)(cfu/ml)實驗次數(shù)人腸埃希菌金黃色匍萄球菌枯草芽砲桿菌白色念珠菌黑曲霉平均菌落數(shù)試驗組的冋收率(%)=試驗組平均菌落數(shù)一供試液對照組平均菌落數(shù)菌液組平均菌落數(shù)X100%稀釋劑對照組平均菌落數(shù)稀釋劑對照組的冋收率(%)=—菌液組平均菌落數(shù)—xl00%試驗組的回收率（％）實驗次數(shù)大腸埃希菌金黃色衙萄球菌枯草芽砲桿菌白色念珠菌黑曲霉3平均回收率稀釋劑對照組的回收率（％）實驗次數(shù)人腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽砲桿菌白色

8、念珠菌黑曲霉平均冋收率5.3.6合格標準計算供試晶組的菌回收率、稀禪劑對照組的菌回收率。A、在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率（稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應均不低于70%。B、若試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數(shù)減去供試品對照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的白分率）均不低于70%,