微生物限度檢查方法驗證

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1、微生物限度檢查方法驗證本品為中成藥制劑，系口服給藥制劑，按中國藥典2005年版要求，需做細菌、霉菌及控制菌檢查，同時需對檢驗方法進行驗證，以確保檢驗方法的準確口J靠。一、試驗材料及方法1.材料1.1試驗樣品：AAAA片(BBBBBBBBBBB有限公司)批號：XXXXX,規(guī)格:XXX1.2實驗菌株：金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003、大腸埃希菌CMCC(B)44102、枯草桿菌CMCC(B)63501、口色念株菌CMCC(F)98001,購自屮國醫(yī)學細菌保藏屮心。2.方法2.1菌液制備：接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌新鮮培養(yǎng)物

2、至營養(yǎng)肉湯中30~35°C，培養(yǎng)18~24小時；接種白色念株菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基屮25°C，培養(yǎng)18-25小吋，上述培養(yǎng)物用％?9無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數為50-100CFU的菌懸液，備用。2.2試液制備：取本品制成仁10的供試液備用。2.3試驗組：取1：10的供試液1ml,置平板中，加入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15~20ml,放冷，倒置平板，30~35°C溫度培養(yǎng)24~28小時，白色念珠菌用改良馬丁培養(yǎng)基，于25°C培養(yǎng)72小吋，觀察結果。根據藥典要求藥品微生物學檢查方法驗證主要用規(guī)定的已知菌數的試驗菌加入到已制備處理好的樣品溶

3、液屮，測定其數據，同時測定樣品本底菌數，并設置稀釋對照組。根據已加入的菌數及測得菌數，計算回收率，規(guī)定耍求：試驗組及稀釋組的菌回收率均不得低于7%,否則需重新選擇樣品處理方法，再進行冋收率直到所采取的方法冋收率試驗達7%以上方可認為驗證試驗符合要求。2.4菌液組按中國藥典2005年版微生物限度菌落計數方法測定每1ml中菌數。2.5供試品對照組：取規(guī)定量的供試液，按中國紗典2005年版微生物限度菌落計數方法測定本品的本底數。2.6稀釋劑對照組取ph7.0無菌氯化鈉■蛋口月東緩沖液1ml,余下同試驗組。2.7驗證試驗至少應進行二次獨立的平行試

4、驗，并分別計算各次試驗的菌回收2.8菌冋收率計算試驗組平均數一供試品對照組平均數試驗組的菌冋收率（.9）=菌液組的平均菌落數稀釋劑對照組平均菌落數稀釋劑對照組菌回收率（.9）=菌液組的平均菌落數2.9結果判斷：對照組的菌冋收率不低于7%,若試驗組及稀釋組的菌冋收率均不低于7%,則符合驗證試驗，可按此方法進行微生物限度測定；若任一次平行試驗組的菌冋收率低于70%,則不符合驗證試驗要求，應建立新的方法并重新進行驗證。2.1AAAA片大腸埃希菌冋收率測定結果見表1表1AAAA片大腸埃希菌冋收率測定試驗次數供試品稀釋倍數菌落讓數冋收率試驗組菌液組

5、供試品對照組稀釋劑對照組試驗組稀釋劑對照組11:10405304975%92%21:10415304977%92%2.2AAAA片金黃色葡萄球菌回收率測定結果見表2表2AAAA片金黃色葡萄球菌冋收率測定試驗次數供試品稀釋倍數菌落計數回收率試驗組菌液組供試品對照組稀釋劑對照組試驗組稀釋劑對照11：10281293029096%99%21:102962930284101%97%2.3AAAA片枯草芽抱桿菌回收率測定試驗次數供試品稀釋倍數菌落計數冋收率試驗組菌液組供試品對照組稀釋劑對照組試驗組稀釋劑對照組11:10737806894%87%21

6、:10667806985%88%1.4AAAA片口色念珠菌回收率測定，見表4表4AAAA片白色念珠菌冋收率測定結果試驗次數供試品稀釋倍數菌落計數冋收率試驗組菌液組供試品對照組稀釋劑對照組試驗組稀釋劑對照組11:10107120010289%85%21:10104120011487%95%3.驗證試驗小結上述試驗表明：木品對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌、白色念珠菌生長無影響，其試驗組、稀釋劑對照組回收率均達70%以上，符合屮國藥典2005年版一部微生物限度檢查驗證試驗要求。以此確定本品微生物限度檢查如下：取木品10g研磨均勻，加滅菌

7、PH7.0無菌氯化鈉■蛋白腺緩沖液100ml制成1:10混懸液，采用常規(guī)法，照《屮國藥典》2005年版一部微生物限度檢查項F進行檢查、判斷。