微生物限度檢查方法的驗(yàn)證

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1、1.目的(PURPOSE)規(guī)范微生物限度檢查方法驗(yàn)證，確保微生物限度檢驗(yàn)方法的結(jié)果準(zhǔn)確可靠2.適用范圍(SCOPE)微生物限度檢查方法驗(yàn)證的起草實(shí)丿施及報(bào)告3?職責(zé)(RESPONSIBILITY)微生物實(shí)驗(yàn)室對本程序的執(zhí)行負(fù)責(zé)4.關(guān)鍵詞(KEYWORDS)微生物限度檢杳方法驗(yàn)證5.定義(DEFINITION)不同的檢品、不同的檢測儀器、試液和培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件等均可能對檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。在檢驗(yàn)實(shí)踐中，主要是以下幾種因素對微生物檢杳產(chǎn)生影響：(1)藥品本身的抑菌性(2)藥品屮防腐劑的抑菌性(3)培養(yǎng)基的促菌生長能力(4)培養(yǎng)條件(5)過濾系統(tǒng)的材質(zhì)為了使微生物限度

2、檢查方法的結(jié)杲準(zhǔn)確可靠，需要對每個品種的具體限度檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證。微生物限度檢查方法準(zhǔn)確與否的核心是對藥品抑菌性的冇效消除。常見方法有化學(xué)中和法、稀釋法和薄膜過濾淋洗法。6?程序(PROCEDURE)本公司對無抑菌性的藥品采用直接接種法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證；具冇抑菌性的藥品采用薄膜過濾法、培養(yǎng)基稀釋法等方法去除抑菌性進(jìn)行方法驗(yàn)證，若通過驗(yàn)證試驗(yàn)，最終將確認(rèn)檢查條件，批準(zhǔn)成為正式檢查方法；若不能冇效消除抑菌性，將根據(jù)具體情況，進(jìn)行其他抑菌性有效消除的驗(yàn)證試驗(yàn)。6.1人員要求進(jìn)行方法驗(yàn)證的人員需有相關(guān)無菌知識背景，經(jīng)過專門的無菌操作及微生物實(shí)驗(yàn)室相關(guān)的管理規(guī)范和操作規(guī)程，具

3、有微生物限度檢查資格。6.2試驗(yàn)環(huán)境DocumentNo：EditionNo.Page2of5文件編號：QC-3.9版本號：01第2頁共5頁Subject:文件名稱：微生物限度檢查方法的驗(yàn)證微生物限度檢查應(yīng)在微生物限度檢查室進(jìn)行，其環(huán)境要求為萬級區(qū)域內(nèi)局部100級的單向流空氣區(qū)進(jìn)行，其屮全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。試驗(yàn)組加菌液和陽性組操作在負(fù)壓的菌種鑒定室邙H性實(shí)驗(yàn)室)內(nèi)進(jìn)行。6.3儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)器具生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、脈動真空蒸汽滅菌器、超凈工作臺、單頭過濾系統(tǒng)、0.45pm無菌濾膜、無菌培養(yǎng)血6.4培養(yǎng)基及試液6.4.1培養(yǎng)基：均應(yīng)是通過促生長試驗(yàn)的培養(yǎng)基

4、：(1)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(2)胰蛋白月東大豆瓊脂培養(yǎng)基(3)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(4)玫瑰紅納培養(yǎng)基6.4.2稀釋劑及沖洗液PH7.0氯化鈉■蛋刨東緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液、0.1%蛋刨東水溶液、0.9%無菌氯化鈉溶液6.5菌種驗(yàn)證試驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代)，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。大腸埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003或ATCC6538]枯草芽砲桿菌(Bacillus

5、subtilis)[CMCC(B)63501或ATCC6633]白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001或ATCC10231]黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003或ATCC16404]6.6驗(yàn)證試驗(yàn)操作步驟：6.6.1菌液制備(1)接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽砲桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰蛋白月東大豆瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18?24小時(白色念珠菌培養(yǎng)可適當(dāng)延長至48小DocumentNo：EditionNo.Page3of5文件編號：QC-3.9版本號：01第3頁共5頁Subject:文件名

6、稱：微生物限度檢查方法的驗(yàn)證時)。(2)接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)24?48小吋。(3)上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每ImL含菌數(shù)為30?lOOcfu的菌懸液(吸出抱了懸液時，用管】I塞有適度疏松的無菌棉花或管II外包扎無菌紗布能過濾菌絲的無菌毛細(xì)吸管)。662無抑菌性藥品檢驗(yàn)方法——直接接種法供試液制備：稱取樣品10g,加至90mL適當(dāng)緩沖液中，混勻，作為1:10的供試液。量取該供試液10mL至另一90mL緩沖液中，混勻，作為1:100的供試液6.6.2.1細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證方法(1)試驗(yàn)組：取供試液1mL和菌液1mL分別注入培

7、養(yǎng)皿小，傾注涼至45°C的瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)。每株試驗(yàn)菌液平行制備2個平川L,細(xì)菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，酵母和霉菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，兩個梯度供試液分別試驗(yàn)。(2)菌液組：取1mL菌液至培養(yǎng)皿中，加相應(yīng)培養(yǎng)基培養(yǎng)，測定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。(3)供試液對照組：各取1mL供試液注入兩個培養(yǎng)皿中，分別加營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，按菌落計(jì)數(shù)方法測定供試詁木底菌數(shù)。(4)稀釋劑對照組：各取1mL稀釋液注入兩個培養(yǎng)皿屮，分別加營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，確定稀釋液的無菌性。6?6?2?2控制菌檢查驗(yàn)證方法(1)試驗(yàn)組：取供試液10mL及1mL

8、大腸桿菌菌