病毒的分離與鑒定

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1、實(shí)驗(yàn)九病毒的分離與鑒定（病毒的分離與鑒定（一）1、病毒的培養(yǎng)與鑒定、2、病毒的、病毒的CPE過(guò)程過(guò)程3、病毒的電鏡照片觀察、4、流感病毒的分離鑒定（-）、流感病毒的分離鑒定（（1）雞胚來(lái)囊腔接種法）（2）病毒的動(dòng)物接種法一小白鼠腦內(nèi)）病毒的動(dòng)物接種法一接種流感病毒的分離鑒定（1）雞胚尿囊腔接種法）（2）病毒的動(dòng)物接種法一小白鼠腦內(nèi)接種）病毒的動(dòng)物接種法一目的：目的：熟悉人工培養(yǎng)病毒的常用方法及其操作技術(shù)。作技術(shù)。雞胚丿求囊腔接種法實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)材料：（1）來(lái)亨雞受精卵、卵架、檢卵燈。來(lái)亨雞受精卵、來(lái)亨雞受精卵卵架、檢卵燈。（2）碘酒、

2、酒精消毒棉球。碘酒、碘酒酒精消毒棉球。（3）滅菌的手術(shù)刀、躡子、剪刀。滅菌的手術(shù)刀、滅菌的手術(shù)刀銀子、剪刀。（4）1ml注射器及針頭。注射器及針頭。注射器及針頭（5）病毒液流感病毒、新城雞瘟病毒。病毒液:流感病毒病毒液流感病毒、新城雞瘟病毒。（6）無(wú)菌膠布。無(wú)菌膠布。無(wú)菌膠布分離鑒定程序病人急性期咽喉含漱液（經(jīng)雙抗處理經(jīng)雙抗處理）經(jīng)雙抗處理雞胚培養(yǎng)（羊水囊或丿求囊腔羊水囊或丿求囊腔）雞胚培養(yǎng)羊水囊或丿求囊腔35°C,72h°C收獲：收獲：取羊水或球囊液作血凝試驗(yàn)（+）（—）盲傳雞胚兩代，作血凝抑制試驗(yàn)盲傳雞胚兩代，仍為陰性時(shí)報(bào)告陰性實(shí)

3、驗(yàn)方法：（1）取孵育取孵育10?12d雞胚雞胚，取孵育雞胚在檢卵燈卜?畫(huà)出氣室界線，于胚胎附近無(wú)大界線，于胚胎附近無(wú)大血管處畫(huà)出標(biāo)記作為注射入口.注射入口（2）將卵置于卵架上消將卵置于卵架上，消將卵置于卵架上毒標(biāo)記處，用無(wú)菌剪刀毒標(biāo)記處用無(wú)菌剪刀尖在標(biāo)記處打一小孔.尖在標(biāo)記處打一小孔實(shí)驗(yàn)方法：（3）用滅菌注射器吸取流感病毒液用滅菌注射器吸取流感病毒液0.2ml,由小孔刺入由小孔刺入0.5cm后，進(jìn)行注射進(jìn)行注射.由小孔刺入后進(jìn)行注射⑷注射后用無(wú)菌膠布注射后，用無(wú)菌膠布注射后封孔，置35度溫箱孵育封孔置度溫箱孵育.度溫箱孵育（5）每日在

4、燈下檢視雞每日在燈下檢視雞胚情況（若雞胚在接種胚情況若雞胚在接種后24h內(nèi)死亡為非特界內(nèi)死亡為非特界性死亡，應(yīng)棄Z性死亡應(yīng)棄Z）.應(yīng)棄Z病毒的動(dòng)物接種法一小白鼠腦內(nèi)接種實(shí)驗(yàn)材料（1）腦炎病毒懸液腦炎病毒懸液.腦炎病毒懸液（2）小門(mén)鼠小白鼠（3W齡）.小門(mén)鼠齡（3）lml的注射器、針頭的注射器、的注射器針頭.（4）碘酒、酒精棉球碘酒、碘酒酒精棉球.實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)方法⑴以左手將小白鼠頭部和體部固定于臺(tái)面以左手將小白鼠頭部和體部固定于臺(tái)面.以左手將小口鼠頭部和體部固定于臺(tái)面（2）用碘酒、酒精棉球消毒頭部右側(cè)眼、耳間部位用碘酒、用碘酒酒精棉球

5、消毒頭部右側(cè)眼、病毒的動(dòng)物接種法一小口鼠腦內(nèi)接種（3）以lml的注射器抽提病毒懸液以右手持注射器以的注射器抽提病毒懸液，以右手持注射器的注射器抽提病毒懸液以右手持注射器，將針頭向眼外與耳根連線中點(diǎn)略偏向耳的方向刺入顱腔，約進(jìn)針約進(jìn)針2~3mm,注入量注入量0.02~0.03ml.入顱腔約進(jìn)針注入量（4）注射完畢將用過(guò)之物煮沸消毒注射完畢,將用過(guò)之物煮沸消毒注射完畢將用過(guò)之物煮沸消毒.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果接種后每FI觀察動(dòng)物2次動(dòng)物一般在接種后動(dòng)物一般在接種后3/d后接種后每日觀察動(dòng)物次.動(dòng)物一般在接種后后開(kāi)始發(fā)病，食欲減退活動(dòng)遲緩，聳毛

6、震顫、卷曲、食欲減退，活動(dòng)遲緩聳毛、開(kāi)始發(fā)病食欲減退活動(dòng)遲緩聳毛、震顫、卷曲、尾強(qiáng)直，逐漸導(dǎo)致麻痹癱瘓而死亡.逐漸導(dǎo)致麻痹、尾強(qiáng)直逐漸導(dǎo)致麻痹、癱瘓而死亡