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《033111113036雙向凝膠電泳技術(shù)原理與應(yīng)用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、雙向凝膠電泳技術(shù)原理與應(yīng)用Principleandapplicationoftwodimensionalgelelectrophoresis姓名：xx班級(jí)：檢驗(yàn)本科1113班學(xué)號(hào):XXX【摘要】人類基因組計(jì)劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于2001年在美國《科學(xué)》雜志和英國《自然》雜志聯(lián)合宣布，他們繪制出了準(zhǔn)確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計(jì)劃已基本完成，隨著后基因組時(shí)代的到來，蛋白質(zhì)組學(xué)得到了空前的發(fā)展，蛋白質(zhì)組研究旨在揭示基因表達(dá)的真正執(zhí)行生命活動(dòng)的全部蛋H質(zhì)的表達(dá)規(guī)律和生物功能。包括蛋白質(zhì)組、蛋白質(zhì)
2、組學(xué)、功能蛋白質(zhì)組學(xué)和結(jié)構(gòu)基因組學(xué)等新的概念的提出，蛋白質(zhì)組學(xué)已成為當(dāng)今生物領(lǐng)域屮極其活躍的學(xué)科。其中雙向電泳(two-dimensionalelectrophoresis,2.DE)是蛋白質(zhì)組研究的三大關(guān)鍵核心技術(shù)Z—[abstract】IlumangenegroupplansandUnitedStatessailailagencticinformationcompanyYu2001inUnitedStatesScieneeundermagazineandUnitedKingdomnaturalundermaga
3、zinejointannounced,theydrawsouthasaccurate,andclear,andcompleteofhumangeneGroupmap,atthispoint,humangenegroupplanshasbasiccompleted,asHougenegrouperaofcomes,proteingrouplcarngethasunprecedentedofdcvclopmcnt,proteingroupresearchaimedatrevealsgeneexpressofrealim
4、plementationlifeactivitiesofallproteinofexpresslawandbiologicalfunction.Ineludesproteome,proteomics,structuralproteomicsandfunctionalgenomicsofnewconcepts,suchasproposed,proteomicshasbecomeextremelyactiveinthefieldofbiologicalsciences.Two-dimensionalgelelectro
5、phorcsis(two-dimensiormlelectrophoresis,2.DE)isoneofthethreekeycoretechnologiesofproteomeresearch【keywords】two-dimensiormlelectrophoresis,2.DEproteomicsPost-genomicsera【前言】由于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量是兩個(gè)彼此不相關(guān)的重要性質(zhì)，而2.DE同時(shí)利用了蛋口質(zhì)間的這兩個(gè)性質(zhì)上的差異分離蛋口質(zhì)，因此2.DE的分離能力非常強(qiáng)大，它甚至能將細(xì)胞中的5000種蛋
6、白分離開，2.DE在分離蛋口混合樣品、比較差異方面有不可替代的作用，結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù)可查明人型蛋片復(fù)合物各組組分，與其他生物技術(shù)如分了生物學(xué)、分了遺傳工程、免疫學(xué)、微量蛋白質(zhì)的口動(dòng)氨基酸序列分析相結(jié)合，可以快速準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)和鑒定新的蛋白質(zhì)?！緹晒舛縋CR的基本原理】"切雙向電泳由于具有高分辨率和高靈敏度已成為分析復(fù)雜蛋白混合物的基木工具⑴o口1975年O'Farrel等⑵建立這種技術(shù)后，已有許多改進(jìn)，使得這一技術(shù)F1趨完善。2-DE是利用蛋白質(zhì)的帶點(diǎn)性和分子量大小的差異，通過兩次凝膠電泳達(dá)到分離蛋白質(zhì)的技術(shù)。第一向
7、電泳是依據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，通過等電聚焦電泳(isoelec-tricfocusing,IEF)將不同凈電荷的蛋Cl質(zhì)在PH梯度介質(zhì)屮外加電場(chǎng)作用形成分離的蛋白質(zhì)區(qū)帶。然后將凝膠包埋在SDS-PAGE凝膠板上端，根據(jù)蛋白質(zhì)分了量的不同，在垂直或水平方向進(jìn)行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),即第二向電泳;在IEF中，蛋白質(zhì)兇等電點(diǎn)不同而被分離;在SDS.PAGE屮，不同分子量的蛋白質(zhì)相互間被分離開，再用考馬斯亮蘭或銀染進(jìn)行檢測(cè)⑶，經(jīng)Pdquest等軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)、解析?！倦p向電泳技術(shù)應(yīng)用過
8、程中的關(guān)鍵步驟】1、樣品制備(蛋白提取)(1)細(xì)胞培養(yǎng)、處理和收集；(2)將細(xì)胞在IEF裂解緩沖液中溶解；蛋口質(zhì)的溶解常采用含有8mol/L尿素、4%[3-(3-膽胺內(nèi)基)-丙磺酸](SHAPS)、50~100mmol/LDTT和40mmol/LTris的樣品緩沖液。樣品溶解得不好會(huì)減少分離到的蛋口質(zhì)數(shù)量，同時(shí)會(huì)造成等電聚焦時(shí)某些蛋口質(zhì)的沉淀，從而減少傳移到
