033111113036 雙向凝膠電泳技術(shù)原理與應(yīng)用

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1、雙向凝膠電泳技術(shù)原理與應(yīng)用Principleandapplicationoftwo-dimensionalgelelectrophoresis姓名：XX班級：檢驗本科1113班學號：XXX【摘要】人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于2001年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯(lián)合宣布，他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質(zhì)組學得到了空前的發(fā)展，蛋白質(zhì)組研究旨在揭示基因表達的真正執(zhí)行生命活動的全部蛋白質(zhì)的表達規(guī)律和生物功能。包括蛋白質(zhì)組、蛋白質(zhì)組學、功能蛋白質(zhì)組學和結(jié)構(gòu)基因組學等新的概念的提出，蛋白質(zhì)組學已成為當今生物

2、領(lǐng)域中極其活躍的學科。其中雙向電泳（two-dimensionalelectrophoresis，2.DE）是蛋白質(zhì)組研究的三大關(guān)鍵核心技術(shù)之一【abstract】HumangenegroupplansandUnitedStatessailailageneticinformationcompanyYu2001inUnitedStatesScienceundermagazineandUnitedKingdomnaturalundermagazinejointannounced,theydrawsouthasaccurate,andclear,andcompleteofhumangeneGrou

3、pmap,atthispoint,humangenegroupplanshasbasiccompleted,asHougenegrouperaofcomes,proteingrouplearngethasunprecedentedofdevelopment,proteingroupresearchaimedatrevealsgeneexpressofrealimplementationlifeactivitiesofallproteinofexpresslawandbiologicalfunction.Includesproteome,proteomics,structuralproteom

4、icsandfunctionalgenomicsofnewconcepts,suchasproposed,proteomicshasbecomeextremelyactiveinthefieldofbiologicalsciences.Two-dimensionalgelelectrophoresis(two-dimensionalelectrophoresis,2.DE)isoneofthethreekeycoretechnologiesofproteomeresearch【關(guān)鍵詞】雙向電泳；蛋白質(zhì)組學；后基因組時代【keywords】two-dimensionalelectrophore

5、sis，2.DEproteomicsPost-genomicsera【前言】由于蛋白質(zhì)的等電點和分子量是兩個彼此不相關(guān)的重要性質(zhì)，而2.DE同時利用了蛋白質(zhì)間的這兩個性質(zhì)上的差異分離蛋白質(zhì)，因此2.DE的分離能力非常強大，它甚至能將細胞中的5000種蛋白分離開，2.DE在分離蛋白混合樣品、比較差異方面有不可替代的作用，結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù)可查明大型蛋白復(fù)合物各組組分，與其他生物技術(shù)如分子生物學、分子遺傳工程、免疫學、微量蛋白質(zhì)的自動氨基酸序列分析相結(jié)合，可以快速準確地發(fā)現(xiàn)和鑒定新的蛋白質(zhì)?！緹晒舛縋CR的基本原理】【1-3】雙向電泳由于具有高分辨率和高靈敏度已成為分析復(fù)雜蛋白混合物的基本工具［

6、1］。自1975年O'Farrel等［2］建立這種技術(shù)后，已有許多改進，使得這一技術(shù)日趨完善。2-DE是利用蛋白質(zhì)的帶點性和分子量大小的差異，通過兩次凝膠電泳達到分離蛋白質(zhì)的技術(shù)。第一向電泳是依據(jù)蛋白質(zhì)的等電點不同，通過等電聚焦電泳（isoelec-tricfocusing，IEF）將不同凈電荷的蛋白質(zhì)在PH梯度介質(zhì)中外加電場作用形成分離的蛋白質(zhì)區(qū)帶。然后將凝膠包埋在SDS-PAGE凝膠板上端，根據(jù)蛋白質(zhì)分子量的不同，在垂直或水平方向進行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），即第二向電泳;在IEF中，蛋白質(zhì)因等電點不同而被分離;在SDS.PAGE中，不同分子量的蛋白質(zhì)相互間

7、被分離開，再用考馬斯亮蘭或銀染進行檢測［3］，經(jīng)Pdquest等軟件對結(jié)果進行比對、解析?！倦p向電泳技術(shù)應(yīng)用過程中的關(guān)鍵步驟】1、樣品制備（蛋白提?。。?）細胞培養(yǎng)、處理和收集;（2）將細胞在IEF裂解緩沖液中溶解;蛋白質(zhì)的溶解常采用含有8mol/L尿素、4%[3-(3-膽胺丙基)–丙磺酸]（SHAPS）、50~100mmol/LDTT和40mmol/LTris的樣品緩沖液。樣品溶解得不好會減少分離到的蛋白