抗心磷脂抗體(ACA)IgGELISA.pdf

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1、抗心磷脂抗體(ACA)IgGELISA用途磷酯有著廣泛的生理意義。循環(huán)抗磷脂抗體的存在可引起種種疾病，這些抗磷脂抗體的作用途徑至今不清楚?？赡芡ㄟ^與內(nèi)皮細(xì)胞膜上磷脂的交叉反應(yīng)防止花生四烯酸釋放，致使前列環(huán)素合成減少，從而促進(jìn)血小板凝聚；另一種機(jī)理是防止血纖維蛋白溶解酶原激活劑的釋放，降低血纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)變成血纖維蛋白溶酶，致使血纖維蛋白裂解減低。ACA的存在常易發(fā)生靜脈及動脈血栓形成。ACA對血小板膜上的磷脂具有交叉反應(yīng)，導(dǎo)致網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝血小板作用加強(qiáng)。ACA陽性見于急性缺血性腦病，缺血性視神

2、經(jīng)病、腦血栓形成、偏頭痛樣頭痛、肺源性高血壓和習(xí)慣性流產(chǎn)?？沽字贵w綜合癥的實(shí)驗(yàn)室診斷主要是抗磷脂抗體測定。本試劑盒用于定性檢測人血清中的抗心磷脂抗體ACAIgG濃度。試劑盒組成(儲存于2-8°C)酶標(biāo)板96wells濃縮洗滌液(20X)25ml吸收液12ml酶聯(lián)物12ml底物A6ml陰性對照1vial底物B6ml終止液6ml標(biāo)本收集1.避免溶血、高血脂標(biāo)本。2.標(biāo)本中若有懸浮物，應(yīng)離心去除。3.標(biāo)本若不及時檢測，請凍存于-20°C。準(zhǔn)備工作1.取出所需板條，其余立即密封放回2-8°C。取出的板條

3、應(yīng)放入自封袋內(nèi)（密封）平衡至室溫再試驗(yàn)，以防水滴凝聚在冷板條上。2.濃縮洗滌液(20X)用雙蒸水稀釋成1X(至500ml)。未用完的放回2-8°C。3.試劑盒應(yīng)平衡至室溫再試驗(yàn)。試驗(yàn)過程1.樣品孔內(nèi)先加入100ul吸收液，再加入10ul血清標(biāo)本。2.加入100ul陰性對照至相應(yīng)孔內(nèi)。(必要時加入100ul陽性血清至適當(dāng)孔內(nèi))3.空白孔內(nèi)加入100ul吸收液。4.輕輕混勻30秒鐘，封住板孔，37°C45分鐘。5.洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加入洗滌液350ul,靜止30秒后甩盡液體，在厚疊吸水紙上拍干，

4、洗5次。6.每孔加入100ul酶聯(lián)物,輕輕混勻30秒鐘，封住板孔，37°C30分鐘。7.洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加入洗滌液350ul,靜止30秒后甩盡液體，在厚疊吸水紙上拍干，洗5次。8.每孔加入底物A、B各50ul；37°C避光10±3分鐘。9.每孔加入終止液50ul，混勻，即刻在450nm處讀取OD值。結(jié)果判斷1.樣品的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值。(對照的OD不用減去空白孔的OD值)2.吸收液內(nèi)含干擾物質(zhì)消除劑。3.陰性對照的OD值應(yīng)小于0.20。4.Correction值標(biāo)于陰性對照上,Cu

5、toff=Correction+陰性對照OD值5.Index值=樣品OD值/Cutoff值6.Index≥1為陽性；Index在0.91-0.99間為可疑；Index≤0.90為陰性。注：ò陽性血清已經(jīng)處理，不具有傳染性，但運(yùn)輸途中可能發(fā)生失活等現(xiàn)象。ò陽性血清已經(jīng)凍融，不宜再冷凍，收到后請立刻冷藏。ò陽性血清已經(jīng)稀釋并添加防腐劑，能夠保存一段時間，但冷藏期間逐漸失活屬正常情況。