初始染菌驗(yàn)證方案.doc

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1、初始染菌驗(yàn)證1.概述無(wú)菌試驗(yàn)是為測(cè)定必須經(jīng)滅菌處理物品帶微生物情況的一種試驗(yàn)。由于多種原因及遵照概率函數(shù)，一些微生物總以有限機(jī)會(huì)得以生存，滅菌結(jié)果只能把微生物的存活概率降到最低限度(10－6)，即允許在100萬(wàn)個(gè)試驗(yàn)對(duì)象中，有1個(gè)以下的有菌生長(zhǎng)就為無(wú)菌；另外無(wú)菌試驗(yàn)只能是一種抽樣檢驗(yàn)，所以其結(jié)果的可靠性是有限的，應(yīng)與滅菌程序監(jiān)測(cè)等結(jié)合進(jìn)行才較安全。選取樣本量的大小：無(wú)菌試驗(yàn)抽樣的數(shù)量取決于：(1)總體(被滅菌物品)的數(shù)量；(2)污染率；(3)原始微生物污染數(shù)量及要求無(wú)菌的概率；(4)不同物品種類及能接受的工作量等。2.驗(yàn)證目的確定使用方法的正確性

2、3.驗(yàn)證內(nèi)容和方法3.1儀器與試劑3.1.1培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基3.1.2菌種金黃色葡萄球菌3.1.3壓力蒸汽滅菌器3.1.4凈化工作臺(tái)3.1.5電熱鼓風(fēng)干燥箱3.1.6生化培養(yǎng)箱(23～28℃)3.1.7霉菌培養(yǎng)箱(35～37℃)3.2驗(yàn)證方法3.2.1培養(yǎng)基和洗脫液制備方法：應(yīng)選用衛(wèi)生部認(rèn)可單位生產(chǎn)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉培養(yǎng)基等，準(zhǔn)確稱量、配制、培養(yǎng)基。經(jīng)115℃滅菌30分鐘備用。3.2.2對(duì)照用菌液：金黃色葡萄球菌菌液，取金黃色葡萄球菌(26003)的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種1白金耳至需營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，在30～35℃培養(yǎng)16～18

3、小時(shí)后，用滅菌的生理鹽水稀釋成50-100cfu即得。3.2.3洗脫液：制備的洗脫液應(yīng)該是無(wú)菌的，并且能促使細(xì)菌從被檢樣品上脫離下來(lái)，又不影響懸液的滲透壓。常用的洗脫液含0.1%非離子活性劑(吐溫－80)、1%蛋白胨和0.85%氯化鈉。本驗(yàn)證采用的為0.9%無(wú)菌氯化鈉緩沖液。3.2.4產(chǎn)品采集與樣品處理3.2.4.1隨機(jī)抽取10件樣品，供試品不能采用破壞性（如管道外部、非管道類）取樣可用浸有無(wú)菌生理鹽水拭子涂抹采樣，被采表面積＜100cm2取全部表面，被采表面積≥100cm2取100cm2.加入到10ml滅菌生理鹽水中。3.2.4.2初始污染菌檢

4、測(cè)方法驗(yàn)證A試驗(yàn)組：待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液1ml，共接種5個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入1mL樣液。B菌液組：取50-100cfu的菌液，接種兩個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入1ml菌液。C供試品對(duì)照組：在供試品液中加入50-100cfu的菌液，接種兩個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入1ml樣液。D緩沖液對(duì)照組：取1ml緩沖液加入50-100cfu的菌液，接種兩個(gè)平皿。用冷卻至45℃左右的熔化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15～20mL倒入平皿內(nèi)，混合均勻。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置35℃±2℃培養(yǎng)48h后，計(jì)算平板上的菌落數(shù)。3.2.5　計(jì)算平均菌數(shù)M×稀釋倍數(shù)N菌數(shù)/每件次（或g）

5、=——————————————件次或重量（g）M——每塊營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上的平均細(xì)菌菌落總數(shù)當(dāng)菌落數(shù)在100內(nèi)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)采用二位有效數(shù)字。3.2.6結(jié)果判定：（A-C）/B>70%，D/B>70%