槐米中蘆丁的提取分離與鑒定.doc

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1、槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（一）一、實驗目的1＞通過蘆丁的捉取與精制掌握堿酸法捉取黃酮類化合物的原理及操作。2、通過蘆丁結構的鑒定，了解昔類結構研究的一般程序和方法。二、實驗原理蘆?。簻\黃色針狀結晶，mpl74°C?178°C。溶解度：1：8000；熱水1:200；冷乙醇1:300；熱乙醇1:30；冷甲醇1:100；熱甲B1:10.桝皮索：黃色結晶，mp313°C?314°C（2分子結品水），能溶解于冷乙醇（1:650）,易溶于沸乙醇（1:60）,可溶于甲醇、乙酸乙酯等；難溶于水，實驗室以稀硫酸水解，乙醇重結晶制得。本實驗主要是利用蘆丁分子中含有較多的酚疑基，顯弱酸性

2、，可溶于堿中，加酸酸化后乂可析出結晶的性質，采用堿溶酸沉法提取，并用蘆丁對冷、熱水的溶解度相差懸殊的特性進行精制。三、藥品材料槐米、石灰乳、鹽酸、廣泛PH試紙四、實驗操作蘆丁的的提取和精制蘆丁的提?。喝』泵?0g置500ml燒杯屮，加入沸水400ml及l(fā)g硼砂，攪拌下加入石灰乳調至PH8-9,保持微沸30分鐘（注意保持PH8-9）,并隨吋補充蒸發(fā)掉的水分,趁熱用雙層紗布濾過,收集濾液，藥渣再用200ml水按同樣的操作再提取20分鐘，合并兩次濾液。濃縮至1/2體積，濾液在60°C-70°C再用鹽酸調至PH4-5,靜置一周，析出蘆丁。五、實驗說明及注意事項1、木實驗采用堿溶

3、液酸沉法從槐米中提取蘆丁，收率穩(wěn)定，且操作簡便。在提取前應注意將槐米搗碎，使蘆丁易于被熱水溶出。槐花中含有大量粘液質，加入石灰乳使生成鈣鹽沉淀除去。PH應嚴格控制8-9,不得超過10,。因為在強堿條件下煮沸，時間稍長可促使蘆丁水解破壞，使提取率明顯下降。酸沉淀時PH4-5,不宜過低，否則會使蕓香甘成悻鹽溶于水，降低了收率。2、提取過程中加入硼砂作用：保護蘆丁分子中的鄰二酚徑基不被氧化，亦保護鄰二酚甕基不與鈣離子絡合，使蘆丁不受損失。槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（二）一、實驗目的1、掌握蘆丁水解生成背元的方法及二者z間的分離。2、熟悉蘆丁、榊皮素的結構性質、檢識方法和紙層

4、析鑒定方法。二實驗原理蘆丁粗品可利用蘆丁對冷、熱水的溶解度相差懸殊的特性進行精制。蘆丁可被稀酸水解，牛?成桝皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通過紙層析鑒定。蘆丁及榊皮素還可以通過化學反應及紫外光譜鑒定。三、藥品材料蘆丁粗品、硫酸、鹽酸、氫氧化鈉、鎂粉、-蔡酚、三氯化鋁、葡萄糖溶液、鼠李糖溶液、95%乙醇、碳酸頓、廣泛PH試紙、層析濾紙等。四、實驗操作（-）蘆丁的提取和精制1、蘆丁的提?。喝∏按尾僮魈J丁沉淀液，慢慢傾去上清液后，抽濾，沉淀用少量冷水洗滌2?3次，抽干，得到蘆丁的粗產(chǎn)物。2、重結晶：稱定粗品蘆丁的重量，按約1:200的比例懸浮于蒸憾水中，煮沸10分鐘使蘆丁全部溶解

5、，趁熱抽濾，冷卻濾液，靜置析晶。抽濾，置于空氣中晾干或60°C-70°C干燥，得精制蘆丁，稱重，計算收率。3、蘆丁的水解：取蘆丁遼，置于250ml圓底燒瓶中，加入2%硫酸溶液80ml直火微沸回流1小吋，至析出的黃色沉淀不再增加為止，放冷抽濾，濾液保留作糖檢查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干稱重，得粗制桝皮素，然后用乙醇（95%乙醇約15ml）重結晶即得精制榊皮素。取水解后的母液20ml,加入碳酸鎖細粉中和至PH7,濾除生成的碳酸頓沉淀。濾液置水浴上濃縮至l?2ml,供紙色譜用。（-）鑒定1、性質實驗（1）鹽酸■鎂粉反應：取蘆丁少量置于試管中，加lml乙醇使溶解,加5

6、滴濃鹽酸，再加少許鎂粉，注意觀察顏色變化的情況。（2）Molisch反應：取蘆丁和榊皮素少量，分別置試管中各加lml乙醇使溶解，加兒滴a■蔡酚乙醇溶液，搖勻，沿管壁加濃硫酸10滴，注意觀察兩液面間產(chǎn)生的顏色變化，并比較蘆丁和榊皮素的區(qū)別。2、色譜鑒定（1）蘆丁及楓皮素的紙色譜檢識點樣：取新華1號濾紙；距下端3cm處用鉛筆劃線，為起始線，隔1.5cm處點樣品。將點好的樣品的濾紙掛在層析杠中飽和半個小吋,再上行展開。支持劑：層析濾液（5cm*10cm）展開劑：正丁醇■醋酸■水（4:1:5）上層樣品：自制榊皮素的乙醇溶液自制蘆丁的乙醇溶液對照品：蘆丁標準的乙醇溶液顯色劑：a、

7、可見光下觀察色斑，紫外燈下觀察熒光斑點b、噴霧三氯化鋁乙醇溶液，紫外燈下觀察熒光斑點（2）糖的紙色譜檢識支持劑：層析濾紙（5cm*10cm）展開劑:正丁醇■醋酸■水（4:1:5）±層樣品：水溶液對照品：1%葡萄糖標準品醇溶液及1%鼠李糖標準品溶液顯色劑：噴以鄰苯二甲酸苯胺溶液，105°C烘焙5分鐘至斑點顯色清晰（3）蘆丁及榊皮素的薄層色譜鑒定吸附劑：硅膠G板，105°C-110°C活化1小吋展開劑：氯仿■甲醇■甲酸（15:5:1）樣品：口制榊皮素的乙醇溶液自制蘆丁的乙醇溶液對照品蘆丁標準品的乙醇溶液顯色劑：a、可見光下觀察色斑，紫外燈下觀