《51 植物快速繁殖技術(shù)》教案.doc

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1、《5?1植物快速繁殖技術(shù)》教案教學目標:嘗試技能性H標中的模仿水平，即學生仿照教師的示范性動作完成對實驗對象的操作。教學重難點：植物組織培養(yǎng)和繁殖。教學過程：植物組織培養(yǎng)是一項操作復雜而精細，操作難度較大的實踐活動，其操作流程包括：配制母液、培養(yǎng)基配制與滅菌、外植體選擇和消毒、接種、形成愈傷組織、誘導從芽和生根、組培苗移栽等操作環(huán)節(jié)。從操作的持續(xù)時間看，完成前舛項活動需要一天，后三項活動需要1?2個月。為了確保在有限的時間內(nèi)順利地開展實驗教學，需要確定學生動手操作的一些重要環(huán)節(jié)和步驟，并針對這些環(huán)節(jié)和步驟提前做好實驗準備。1、實驗室的準備工作本實

2、驗需要作好三項實驗準備：一是提前配制各種母液；二是提前準備MS培養(yǎng)基；三是選擇外植體并進行預處理。1.1配制母液母液中含有大量元索、微量元索、激索（植物生物調(diào)節(jié)劑）和維生索等有機成分，母液濃度是實際溶液濃度的5-10倍。配制母液花費時間多，需要用到溶暈瓶、移液管等精密儀器，無法由每位學生親自操作，教師可帶領部分學生在課外進行。母液的類型和配制順序如T：ms大量元素n母液的配制MS徴量元素舟液的配制F氏鹽母液的配制植物生長調(diào)節(jié)劑母液的配制配制母液的注意事項：⑴自來水或河水中含有大暈的礦質(zhì)元素，勿用配制母液；⑵配制大暈元素和微量元素母液時，應將每種化

3、合物單獨溶解后，再一一混合，同時還應用適量的蒸憎水清洗燒杯內(nèi)壁，并將清洗后的蒸憎水倒入混合溶液中，這樣可以保證每種元素的濃度，混合時要按照教材附表中的順序進行，最后加入的是氯化鈣溶液，這樣可以避免發(fā)生沉淀：⑶配制好的母液要先倒入1000ml燒杯中，再由燒杯轉(zhuǎn)入1000ml細口瓶小，不可由容量瓶直接倒入細口瓶中；⑷注意觀察母液中是否有絮狀物，出現(xiàn)絮狀物表明離子之間發(fā)生反應，需要重新配制母液；⑸植物生長調(diào)節(jié)劑難溶于水，需要堿或酸助溶，一般生長素類物質(zhì)用堿(0.1mol/LNaOHl-3ml)或酒精(75-95%的酒精1?3ml)助溶，細胞分裂素類物質(zhì)

4、一般用酸(O.lmol/LHCLl?3ml)助溶，加入蒸館水定溶時要緩慢，也可用水浴法助溶：⑹用棕色細II瓶盛裝有機物母液和植物生長調(diào)節(jié)劑母液，避免透射光損害母液中的有機成分；⑺在瓶壁上貼好各種母液的標簽(下圖所示)；⑻將配制好的母液放入冰箱小或陰涼處保存。MS人量元索母戒[OOml/L20X年x月汨MS誼星元親母狡10mKL201＞年x月x日MS鐵蕓母潘lOOnl/L200x年乂月乂日有機較1孚誡lOidH.20Jx年二月x日奈乙酸（NAa）53mg/l00ml20X年x月x日MS是穆拉希吉(Murashige)和斯庫克(Skoog)兩位科學家

5、第一個字母的縮寫，他們于1962年為培養(yǎng)煙草而設計了一種培養(yǎng)基，這就是組培使用中最為廣泛的MS培養(yǎng)基；標簽中間一行的數(shù)字及單位表示的意義如下，例如,100ml/L,即配制1升培養(yǎng)基只需從母液中提取100ml即可；50mg/100ml,表明100ml母液中含有50mg荼乙酸，如取4mg的荼乙酸，只需提取8ml母液。除母液需提前配制好外，消毒液也需要提前配制好。外植體消毒一般采用75%的酒精、2-10%的次氯酸鈉溶液等。1.2培養(yǎng)基的配制與滅菌培養(yǎng)基的類型有很多種，通常采用MS培養(yǎng)基。配制培養(yǎng)慕的流程如下:上述的培養(yǎng)基配制流程中，加入各種母液的時間是

6、在瓊脂溶化之后，這樣既可避免加熱使母液中的各種離子發(fā)生反應，又可避免有機物母液和植物牛長調(diào)節(jié)劑因高溫受到損害。將母液加入培養(yǎng)基的順序是：先提取大量元索、微量元索、鐵鹽、有機物母液，后提取植物生長調(diào)節(jié)劑母液，切勿先提取植物生長調(diào)節(jié)劑母液，這是因為該溶液中含有酸或堿，容易與其他元素形成沉淀而失敗。培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌，滅菌時間一般為15-20min,滅好菌的培養(yǎng)基不易保存過長時間，通常是現(xiàn)用現(xiàn)配。在對培養(yǎng)基滅菌的同時，也要對解剖刀、銀子、燒杯、錐形瓶、牛皮紙等必要的儀器設備進行滅菌。1.3外植體的選擇和預處理根據(jù)植物細胞的全能性原理，選擇任何活

7、的植物體都能培養(yǎng)出組培苗，但不同植物的各種組織和器官的分裂能力不同，同時還要考慮消毒處理的特殊情況，因此，選擇恰當?shù)耐庵搀w進行接種既有利于消毒，避免污染，艾有利于在較短時間內(nèi)形成組培苗，從而提高組培成功率。下而是選擇外植體時需要考慮的一些因素及說明?？紤]的因素說明外植體的年齡一般情況外植體的年齡越小，分化的程度越小，組培的成功率就越高，因此，盡量選擇幼嫩的植物組織或器官作為外植體外植體的大小外植體很小和很大都不合適，很小的外植體極容易死亡，很大的外植體不容易消毒，因此，要選擇大小適中的外植體。例如，如果用菊花的芽進行組培，選取的芽可為3mm左右外

8、植體所在的部位一般選擇植物的芽尖、根尖或幼嫩的莖作為外植體，這些部位的組織分裂能力強，容易形成愈傷組織外植體的外觀形態(tài)由于外植體的消毒工