植物離體快速繁殖.ppt

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1、第五章植物離體微繁主要內(nèi)容：1.植物離體微繁2.影響植物離體微繁成功的因素3.植物離體微繁過程中常見異常現(xiàn)象及對策植物有哪些繁殖方法？思考:分株繁殖壓條繁殖播種繁殖嫁接繁殖扦插繁殖組織培養(yǎng)繁殖1.植物離體微繁植物離體微繁(micropropagation)：是指利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行的一種營養(yǎng)繁殖方法，是常規(guī)營養(yǎng)繁殖方法的一種擴(kuò)展和延伸。是在短期內(nèi)獲得大量遺傳性狀一致的個體的方法。屬離體無性繁殖(propagationinvitro)。又稱為快速繁殖（rapidcloneprogagation）。植物離體微繁的特點(diǎn)1.繁

2、殖系數(shù)高，繁殖周期短，繁殖速度快：它的高速度是以下三種因素構(gòu)成的：①有較高的增殖倍數(shù);②較短的增殖周期；③周年生產(chǎn)。2.應(yīng)用廣泛，是推廣良種的重要手段：占用空間小，生產(chǎn)效率高，省時、省工、節(jié)約土地。3.繁殖材料用量少，不受季節(jié)限制，可實現(xiàn)工廠化生產(chǎn)；4.能獲得無毒苗木無性系5.木本植物應(yīng)用潛力大：繁殖各種珍稀、瀕危、名貴、突變物種。1.1植物離體微繁過程第一階段穩(wěn)定無菌培養(yǎng)體系的建立時期第二階段穩(wěn)定培養(yǎng)系的增殖、生長和增狀時期第三階段誘導(dǎo)莖芽生根形成小苗時期第四階段生根小苗移栽和馴化時期第五階段商品苗培育時期第一階段：穩(wěn)定

3、無菌培養(yǎng)體系的建立時期任何植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)體系的建立，都必須采制適宜的外植體。外植體的選擇有什么要求呢？第一，選擇優(yōu)良的種質(zhì)：①易于離體培養(yǎng)的種類、品種、類型；②生產(chǎn)或研究上意義比較大的種類、品種、類型。第二，選擇健壯的植株：第三，選擇合適的部位莖尖：生長速度快，遺傳穩(wěn)定，無病毒分布。但材料來源有限，為此莖段也是重要來源。葉片：采用幼嫩的葉片較好。如：秋海棠、矮牽牛、菊花等?；ǎɑɡ伲簱?jù)一些學(xué)者的觀點(diǎn)，在花誘導(dǎo)之前細(xì)胞的脫分化容易發(fā)生，故外植體常取發(fā)育早期階段的花，即花蕾。胚：大多數(shù)花卉都可用胚培養(yǎng)的方式進(jìn)行快繁，如：

4、百合、羽葉甘藍(lán)、蝴蝶蘭、卡特蘭等。外植體的選擇第四，取材季節(jié)合理：①選取外植體的季節(jié)和時間，對培養(yǎng)材料的啟動和培養(yǎng)至關(guān)重要。②一般在生長季—春夏。第五，考慮器官的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡；第六，選擇大小合適的外植體；外植體過大，不易滅菌，過小，不易成活。一般0.5-1cm；脫毒培養(yǎng)0.2-0.5cm。外植體的滅菌無菌的外植體材料是植物組織培養(yǎng)成功的重要前提與可靠保證，而消毒則是獲得無菌外植體的有效方法。取來的外植體需要經(jīng)過仔細(xì)的表面滅菌處理，外植體滅菌常用消毒劑。消毒注意事項：1.正確選擇消毒劑種類及濃度、消毒時間，減少組織的死

5、亡.2.在用消毒劑對材料表面消毒后，必須用無菌水漂洗3次以上以除去殘留殺菌劑，但用酒精消毒時，則不必漂洗。3.與消毒劑接觸過的切面在轉(zhuǎn)移至無菌基質(zhì)前需切除，因為消毒劑會阻礙植物細(xì)胞對基質(zhì)中營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。4.在外植體污染嚴(yán)重時，應(yīng)用流水漂洗1h以上或先種子培養(yǎng)得到無菌種苗，然后用其各個部分建立組織培養(yǎng)。5.Hgcl2效果最好，但較難從外植體去除，對人的傷害也最大，用后要用水沖洗至少5次。外植體的接種和培養(yǎng)外植體的接種—無菌操作外植體表面滅菌—切取分離—無菌培養(yǎng)基外植體的培養(yǎng)光照、溫度、濕度、培養(yǎng)基pH、氣體調(diào)節(jié)接種材料修整

6、與沖洗材料表面滅菌1.葉片0.5cm×0.5cm2.微莖尖0.2-0.5mm3.帶節(jié)莖段0.5-1.0cm外植體切割4.芽叢分離①頂梢切割成0.5－1.0cm的莖尖；（除葉,剝?nèi)バ菝哐康镊[片)；②莖尖流水沖洗2－4h；③75%酒精迅速漂洗30s；④0.1%升汞或稀釋20倍的次氯酸鈉液消毒5－8min(取自老枝條上的可適當(dāng)延長時間)；⑤無菌水沖洗3-5次。材料處理及消毒外植體接入培養(yǎng)基注意無菌培養(yǎng)體系的建立需注意下面兩個問題：1.采樣和表面滅菌；2.首次接種污染率的估算與對策：首次接種，小容器，多數(shù)量，盡量分散，互相隔離，效

7、果最好。從植物組織培養(yǎng)積累的知識中，可將植物再生過程劃分為四種方式：1)頂芽和腋芽的發(fā)育2)不定芽的發(fā)育3)體細(xì)胞胚狀體的發(fā)生與發(fā)育4)原球莖的發(fā)育第二階段：穩(wěn)定培養(yǎng)系的增殖、生長和增狀時期（誘導(dǎo)外植體生長與分化）1)頂芽和腋芽的發(fā)育頂芽和腋芽在離體培養(yǎng)中都可被誘導(dǎo)而發(fā)育。從芽萌發(fā)出苗，即枝條，枝條向上延伸，新形成的芽將逐漸發(fā)育。如果將新形成的芽切割下來，使之再萌發(fā)出新的枝條，在適當(dāng)?shù)臈l件下使枝條生根，并種植到土壤中去，便完成了植物再生的全過程。適宜這種再生繁殖的植物，在采樣時只能采用頂芽，側(cè)芽或帶有芽的莖切段，其它如種子

8、，萌發(fā)后取枝條等也可以。幼嫩莖尖營養(yǎng)芽莖尖培養(yǎng)在頂芽的培養(yǎng)中，還有較為特殊的一種方式，即采用極其幼嫩的頂芽的莖尖分生組織為材料，由它作為外植體。過去常被稱為“分生組織培養(yǎng)”，但目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為以稱作“莖尖培養(yǎng)”為宜。真正的莖尖分生組織是被限制在一極小的范圍內(nèi)，那里的細(xì)胞幾乎沒有分化，在活躍地進(jìn)行細(xì)胞分裂