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1、生物樣品預處理的常用方法以及最新進展常用的處理方法處理方法簡介4生物樣品預處理的目的1預處理的指導原則23目錄一、生物樣品生物樣品的種類生物樣品血液尿液其他頭發(fā)唾液組織器官膽汁、乳汁、腦脊液、淚液、精液、胃液、胰液、淋巴液、糞便等。一、生物樣品預處理的目的1.使藥物從綴合物及結合物中釋放出來，以測定藥物的總濃度。2.生物樣品介質組成復雜，干擾多，而藥物組分是微量的，必須先經過預處理，使純化，富集。3.為了適應和符合測定方法所要求的靈敏度。4.為了防止分析儀器的污染、劣化，提高測定靈敏度、準確度、精密度和選擇
2、性等。二、生物樣品預處理的指導原則生物樣品進行預處理時應考慮到的問題：1.藥物的理化性質和存在性質2.待測藥物的濃度3.藥物測定的目的4.選用的生物樣品類型5.樣品預處理與分析技術的關系二、指導原則-預處理應考慮問題1.藥物的理化性質和存在形式A.酸堿性質、未電離分子的親脂性、揮發(fā)性：涉及藥物的提取性質、是否揮發(fā)損失以及能否采用GC法a.較親脂的藥物：可用溶劑萃取，也可用烷基鍵和相硅膠、大孔吸附樹脂及親水型填料SPE等方法。b.親水性較強且有酸堿性、可電離藥物：離子交換柱和離子對液液萃取等。c.親水性較強但
3、不能電離藥物：沉淀蛋白二、指導原則-預處理應考慮問題1.藥物的理化性質和存在形式B.藥物在體內的存在形式及蛋白結合率：a.結合蛋白率高:首先去蛋白b.多為代謝綴合物：綴合物水解C.藥物的光譜特性及官能團特性：涉及分析儀器的選擇以及是否需要衍生化和特殊檢測器。紫外吸收強弱：是否用UV檢測器含有-NO2、-Cl等電負性基團：ECD檢測器二、指導原則-預處理應考慮問題1.藥物的理化性質和存在形式D.藥物的穩(wěn)定性：a.易氧化藥物:加入抗氧劑b.易被光分解藥物:避光c.易被酯酶水解藥物:對酶進行滅活二、指導原則-預處
4、理應考慮問題2.待測藥物的濃度濃度越大，預處理要求越低；反之，濃度越小，預處理要求越高。例如，地高辛的治療血藥濃度為1-2ng/ml,而水楊酸的治療血藥濃度為20-100μg/ml。3.藥物測定的目的a.急性中毒病例：快速鑒定所懷疑的藥物，盡可能短時間測得。預處理可粗放些。b.分別獲得酸性、中性或堿性代謝物：要考慮全面、細致二、指導原則-預處理應考慮問題4.選用的生物樣品類型血漿、血清：除蛋白然后提取唾液：離心去粘蛋白尿液：酸水解或酶水解法使綴合物水解頭發(fā)：有機破壞5.樣品預處理與分析技術的關系樣品預處理需
5、要的凈化程度與所用分析方法是否專屬、是否具有分離能力、檢測系統(tǒng)對雜質污染的耐受程度有關。三、常用的處理方法常用方法1.有機破壞法2.除蛋白法3.綴合物的水解4.分離，純化與濃集5.衍生化法重點介紹除蛋白法液液萃取法三、常用的處理方法-有機破壞法1.有機破壞法分類特點樣品濕法破壞硝酸—高氯酸法1、硫酸作為分解劑（消化劑），加氧化劑（硝酸、高氯酸、過氧化氫等）作輔助分解劑。2、破壞能力強，反應比較激烈，操作時，應在通風櫥內進行。3、先低溫反應，再高溫蒸發(fā)，以免發(fā)生爆炸；4、所得的無機金屬離子，一般為高價態(tài)。血、
6、尿、組織電熱消化器法人發(fā)電熱板消化法烘箱消化法干法破壞高溫熾灼法1、適用于鹵素、硒、硫、磷等微量元素分析的前處理2、高溫熾灼法：坩堝，先完全炭化，再灰化，鹽酸溶解定容。鹽酸加無水碳酸鈉或氧化鎂等以助灰化。（高溫電子爐、低溫等離子）3、氧瓶燃燒法：密閉的燃燒瓶中進行燃燒，選擇適當吸收液。氧瓶燃燒法血、人發(fā)三、常用的處理方法-除蛋白法蛋白質沉淀酶解法去除蛋白三、常用的處理方法-除蛋白法1.蛋白質沉淀蛋白質分子凝聚從溶液中析出的現象稱為蛋白質沉淀(precipitation)，變性蛋白質一般易于沉淀，但也可不變性
7、而使蛋白質沉淀，在一定的條件下，變性的蛋白質也可不發(fā)生沉淀。表面水化層調節(jié)pH至等電點蛋白質親水膠體顆粒凝集析出表面電荷加入脫水劑破壞破壞三、常用的處理方法-除蛋白法測定血樣時，首先應去除蛋白質。去除蛋白質作用：a.可使結合型藥物釋放出來，以便測定藥物的總濃度；b.可預防提取過程中蛋白質發(fā)泡，減少乳化的形成；c.可保護儀器性能（如保護HPLC柱不被污染），延長使用期限。三、常用的處理方法-除蛋白法1.蛋白質沉淀方法溶劑解法鹽析和脫水加入中性鹽蛋白質沉淀加入強酸生成不溶性鹽沉淀加入重金屬沉淀劑三、常用的處理方
8、法-除蛋白法A.溶劑解法-加入與水相混溶的有機溶劑加入水溶性的有機溶劑，可使蛋白質分子內及分子間的氫鍵發(fā)生變化而使蛋白質凝聚，使與蛋白質結合的藥物釋放出來。常用的水溶性有機溶劑有：乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氫呋喃等。含藥物的血漿或血清與水溶性有機溶劑的體積比為1：（1～3）時，就可以將90％以上的蛋白質除去。水溶性有機溶劑的種類不同時，析出的蛋白質形狀亦不同；并且所得上清液的pH值也稍有差別，如用乙腈或甲醇
