生物樣品預處理技術課件.ppt

《生物樣品預處理技術課件.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在教育資源-天天文庫。

1、生物體內藥物分析選論生物體內樣品及其預處理技術生物體內藥物分析的特點常規(guī)藥物分析：原料藥物和藥物制劑分析真?zhèn)舞b別、純度檢查、含量測定共存雜質、制劑輔料、復方藥物生物體內藥物分析：復雜生物樣品的微量分析藥物濃度低樣品采量少干擾成分多研究對象血樣尿液唾液膽汁組織器官預處理方法分離純化濃集實驗結果測定動物實驗方法學考察和驗證樣品前處理樣品分析數(shù)據(jù)處理具體考慮生物體內藥物分析的研究對象即生物體內樣品，則需要從生物樣品來源、樣品種類和檢測組分三方面來討論。1.生物樣品來源：決定于研究的目的人體與動物2.生物樣品種類：如體液、器官、組織和排泄物等

2、3.檢測組分：即生物樣品中的藥物及其代謝物等生物樣品來源臨床前吸收試驗組織分布試驗代謝排泄毒代動力學臨床臨床藥代動力學制劑生物利用度及生物等效性生物樣品種類生物樣品種類選取的一般原則：（1）必須是能夠反映出濃度與藥物效應之間關系；（2）易于獲得；（3）便于處理，適合于分析；（4）根據(jù)不同目的與要求進行選取。生物樣品種類可分為均勻生物樣品：血液（血漿、血清、全血）、尿液、唾液、膽汁、乳汁、腦脊液、淋巴液、汗液和性腺分泌液等體液呼出氣體非均勻生物樣品：心、肝、腎、脾、肺、腦、胃、腸、子宮或睪丸、脂肪、肌肉、皮膚等器官、組織糞便排泄物生物樣

3、品種類檢測組分即生物樣品中的藥物及其代謝物等（1）原形藥物的測定；（2）游離藥物的監(jiān)測；（3）活性代謝產(chǎn)物的監(jiān)測；（4）藥物對映體的監(jiān)測；（5）作用部位藥物濃度的測定；（6）體內內源性物質的測定。一、生物樣品的一般處理原則生物樣品貯存生物樣品均勻化結合物水解生物基質的性質測定對象的性質一、生物樣品的一般處理原則生物樣品的貯存采集哪種生物樣品：血漿、血清、全血、尿、組織…血漿酯酶引起的水解——血漿樣品—加入酯酶抑制劑微生物導致的腐敗——尿液樣品—加入防腐劑冷藏儲存條件–20℃：大部分藥物–80℃：阿莫西林等抗生素加穩(wěn)定劑：卡托普利等立即

4、測試：維生素C等一、生物樣品的一般處理原則生物樣品均勻化體液樣品：尿液、血漿——渦旋混勻固體樣品：組織、糞便——加入適量溶劑進行高速勻漿一、生物樣品的一般處理原則結合物水解Ⅱ相代謝產(chǎn)物如葡萄糖醛酸結合物、硫酸酯類結合物極性大、親水性、不易于提取富集酸水解：簡便、快速，不具備專一性，注意藥物是否被破壞酶水解：β-葡萄糖苷酶、硫酸酯酶，專一性強，時間長，實驗費用高二、生物樣品預處理方法預處理的目的：去蛋白，釋放藥物樣品純化和富集滿足分析方法靈敏度的需要防止分析儀器的污染和劣化滿足大量樣品分析的需要微量、快速二、生物樣品預處理方法常用的

5、生物樣品預處理方法沉淀蛋白液液萃取液固提取二、生物樣品預處理方法沉淀蛋白操作：50μl血漿＋150μl甲醇→渦旋1min→3500rpm離心10min→取上清液進樣分析常用沉淀劑：與水能混溶的有機溶劑——甲醇、乙腈酸性沉淀劑——三氯醋酸、高氯酸二、生物樣品預處理方法應用中注意問題：去蛋白后的上清直接進樣對色譜分離及色譜柱和儀器的影響色譜峰形液質聯(lián)用分析中的基質效應檢測靈敏度是否足夠二、生物樣品預處理方法液液萃取操作：血漿＋一定體積萃取溶劑→振蕩/渦旋萃取3～5min→3500rpm離心10min→取上清液氮氣下吹干→流動相復溶后進樣分

6、析溶劑的選擇與純度的要求有機溶劑相和水相的體積水相的pH值二、生物樣品預處理方法常用的液液萃取溶劑：正己烷叔丁基甲醚乙醚乙酸乙酯正丁醇*相似相容原理進行選用沸點低、易于揮散和濃集不易乳化、不影響紫外檢測體積選擇依實驗考察極性增加二、生物樣品預處理方法水相的pH值水相pH值主要由藥物的pKa確定對于堿性藥物最佳pH值要高于pKa值1～2個pH單位對于酸性藥物要低1～2個pH單位堿性藥物在堿性pH值、酸性藥物在酸性pH值介質中提取血漿加入1MNaOH進行堿化后用適合溶劑提取二、生物樣品預處理方法液液萃取的優(yōu)點：選擇性高便于純化和富集操作方

7、便對儀器的污染小缺點：易產(chǎn)生乳化操作費時，不易于自動化二、生物樣品預處理方法液固提取固相萃取超聲提取——對于固體生物樣品，如糞便，組織等，勻漿處理后，用合適的有機溶劑進行液固萃取，渦旋振蕩提取或者超聲提取，上清液吹干或者進行第二次液液萃取，以便進一步的純化富集二、生物樣品預處理方法固相萃取操作：活化上樣淋洗洗脫收集直接進樣或者濃縮后進樣與色譜理論相同二、生物樣品預處理方法二、生物樣品預處理方法采用離心或者抽真空的辦法，以一定離心力或者流速，進行上樣、淋洗和洗脫二、生物樣品預處理方法固相萃取的優(yōu)點：無乳化現(xiàn)象使用溶劑安全價格低廉萃取效

8、率高處理速度快，具有一定通量易于同時萃取出目標藥物及其代謝產(chǎn)物，包括極性強的Ⅱ相代謝產(chǎn)物MCX固相萃取柱反相作用和陽離子交換作用酸性環(huán)境中含氮堿性基團與磺酸基結合酸性藥物呈分子狀態(tài)發(fā)生反相結合作用示例不同生物樣品中虎杖苷